暗褐网柄牛肝菌SSR分子标记[发明专利]

(12)发明专利申请

(10)申请公布号(10)申请公布号 CN 104946763 A (43)申请公布日(43)申请公布日 2015.09.30

(21)申请号 2015103332.1(22)申请日 2015.06.18

(71)申请人云南省热带作物科学研究所

地址666100 云南省思茅市景洪市宣慰大道

99号

申请人云南大学(72)发明人曹旸 徐建平 张颖 张春霞

何明霞 刘静 高锋 王文兵许欣景(74)专利代理机构昆明今威专利商标代理有限

公司 53115

代理人杨宏珍(51)Int.Cl.

C12Q 1/04(2006.01)C12N 15/11(2006.01)

C12Q 1/68(2006.01)

()发明名称

暗褐网柄牛肝菌SSR分子标记(57)摘要

本发明涉及暗褐网柄牛肝菌SSR分子标记，属DNA分子标记技术领域。本发明在已经获得其基因组数据的基础之上，利用常规的生物信息学方法，在基因组水平上检测其SSR的分布，进行引物设计，利用来自西双版纳地区的暗褐网柄牛肝菌样品，选取部分引物进行初筛、复筛后，得到15个具有多态性的SSR分子标记，其编号为： PP50097、PP100、PP32087、PP85099、PP80085、PP56123、PP76127、PP57130、PP39117、PP60130、PP93120、PP23157、PP45160、PP30156、PP48147。本发明的有益效果在于：暗褐网柄牛肝菌SSR分子标记，建立技术体系，弥补其特异性分子标记的空白，为暗褐网柄牛肝菌遗传多样性，群体遗传学及种质鉴定研究提供有力的研究工具。

权利要求书2页 说明书5页序列表7页 附图1页

C N 1 0 4 9 4 6 7 6 3 A CN 104946763 A

权 利 要 求 书

1/2页

1.暗褐网柄牛肝菌SSR分子标记，其特征在于暗褐网柄牛肝菌SSR分子标记包括15个具有多态性的SSR分子标记，其编号为： PP50097、PP100、PP32087、PP85099、PP80085、PP56123、PP76127、PP57130、PP39117、PP60130、PP93120、PP23157、PP45160、PP30156、PP48147；其中：

上述SSR分子标记的核苷酸序列分别为：PP50097，由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列组成：PP100，由SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列组成：PP32087，由SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列组成：PP85099，由SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列组成：PP80085，由SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列组成：PP56123，由SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列组成：PP76127，由SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列组成：PP57130，由SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列组成：PP39117，由SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列组成：PP60130，由SEQ ID NO:10所示的核苷酸序列组成：PP93120，由SEQ ID NO:11所示的核苷酸序列组成：PP23157，由SEQ ID NO:12所示的核苷酸序列组成：PP45160，由SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列组成：PP30156，由SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列组成：PP48147，由SEQ ID NO:15所示的核苷酸序列组成：上述SSR分子标记的引物序列分别为：PP50097-F：ATACGACCCTGTGTACTGCCATTC ；PP50097-R：AGTGCGATGAGTAAATTCGACGAC ；PP100-F：GAATTGAGTGCGTGTGTCATGAGT ；PP100-R：GTTCGATGGCATCACCAACAT ；PP32087-F：GCACAGGTATTGTCATCAACTTGG ；PP32087-R：GTCCATGTAACACTACCACCACCA ；PP85099-F：TGAAAGACAGACCTCGGGATAGTC ；PP85099-R：TTACTCCAGTGTGCTGTTCAAACC ；PP80085-F：ACGACTACTACGACTACCACCGC ；PP80085-R：TCATAGTCGTTATCGTTGTTCGTTG ；PP56123-F：GTACGTATGCACAAGTAAGCGACG ；PP56123-R：ATCTGATAACTTGAAACCCCAACG ；PP76127-F：TGTTTGAACGTGCTAGATCGAGAG ；PP76127-R：CCCTTCCTGGACTTGCATTATTAC ；PP57130-F：ATATGGCCACCTTGTATCACCATC ；PP57130-R：CTCAAGTGTGGGAGTTGCCTCTAT ；PP39117-F：AGTCTTTACGCGCTTGTTGGATAC ；PP39117-R：GGAGAGAAAATGGACTGACTTGGA ；

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权 利 要 求 书

2/2页

PP60130-F：CCTTCTTGCTCAGATTTTGGAGAA ；

PP60130-R：CCATCCTCATTATCTCGAGTCCC ；PP93120-F：GGGACCAATGATGGAAATCAAATA ；PP93120-R：TAAGGTCAATGAGATTGTTTCGCA ；PP23157-F：AATGATCATGACCACGACGATG ；PP23157-R：ACACTAATAGGAGTCGTCGTTCGC ；PP45160-F：GTTACATCCTCTGGACTGGCATCT ；PP45160-R：ATATCAGCTGTAAGGAGTGGCGTT ；PP30156-F：TTAGCACATATTGCATAGGCATGG ；PP30156-R：GAAGCACAATCCCGAAATAGATTG ；PP48147-F：ATCATCATCATCATTCACAATGGG ；PP48147-R：CATGAACAATGGTGACAACAACAA 。

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说 明 书

暗褐网柄牛肝菌SSR分子标记

1/5页

技术领域

本发明涉及暗褐网柄牛肝菌SSR分子标记，具体涉及暗褐网柄牛肝菌的简单重复序列（SSRs，Simple sequence repeats）分子标记，属DNA分子标记技术领域。

[0001]

背景技术

简单重复序列（SSRs，Simple Sequence Repeats），又叫做微卫星位点（Microsatellites），是由1 ~ 6 bp的重复单元串联重复而成的序列（Sharma et al. 2007）。它们在原核、真核基因组中广泛分布，在基因编码区及非编码区都能找到（Li et al. 2004）。作为分子标记，SSR有许多优点：在整个基因组中分布广泛、均匀且数量充足，因而多态性很高；SSR标记呈孟德尔共显性遗传，可以区分纯合、杂合基因型；PCR扩增仅需要少量DNA，且对DNA的质量要求不高。近年来还发现SSR在基因组中可能发挥着一些功能，例如影响基因、基因组系统组成等。因此从基因组水平上了解SSR的分布是非常重要的。传统获得SSR标记的方法需通过建立、筛选基因组文库、克隆测序、引物设计等一系列实验，耗费许多人力、物力。而现在，随着基因组测序越来越便捷，由基因组数据中直接开发SSR标记的方法也被运用得越来越多。[0003] 暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）是云南南部及泰国北部最受欢迎的野生食用菌之一。在脱离宿主树，接种于人工培养基的情况下，暗褐网柄牛肝菌在菇房中经过约3个月时间培养，能够完成整个生活史，形成子实体，是目前牛肝菌目中唯一一个担孢子、菌丝体在实验室条件下能够萌发、生长、交配，并实现温室栽培出菇的物种。作为刚刚开始被人工栽培的物种，暗褐网柄牛肝菌生物学、生态学的研究基本上还停留在现象观察的程度上，能用的特异性分子标记缺乏，对它的遗传多样性、群体遗传学方面的特性更是几乎一无所知。利用上述方法，开发SSR分子标记，能对其遗传多样性，群体遗传学及种质鉴定进行研究，对将来新品种的开发，种质资源的评价，栽培技术的创新突破都具有十分重要的意义。

[0002]

发明内容

本发明的目的在于，根据目前暗褐网柄牛肝菌研究的需要，开发具有多态性的暗

褐网柄牛肝菌SSR分子标记，建立技术体系，弥补其特异性分子标记的空白，为其遗传多样性，群体遗传学及种质鉴定研究提供有力的研究工具。[0005] 本发明的技术方案为：在已经获得暗褐网柄牛肝菌基因组数据的基础之上，利用常规生物信息学方法，在基因组水平上检测其SSR的分布，进行引物设计，利用来自西双版纳地区的暗褐网柄牛肝菌样品，选取部分引物进行初筛、复筛后，得到15个具有多态性的SSR分子标记，其编号为： PP50097、PP100、PP32087、PP85099、PP80085、PP56123、PP76127、PP57130、PP39117、PP60130、PP93120、PP23157、PP45160、PP30156、PP48147。

[0004] [0006]

上述SSR分子标记的核苷酸序列分别为：

PP50097（143 bp），由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列组成：

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说 明 书

2/5页

ACCAAGTTTTTCCCCACTCCCTTCTCAAAGCCCCCTTCACCCACTTACTTACGAGGGCCGGCGGGAGCAATTCAAGATGGTAGGGTGATATTTCACCAGATCGCGTGAGCTCATACGACCCTGTGTACTGCCATTCGTTGGCC ；

PP100（312 bp），由SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列组成：

ATGTGATGATGAAGTCAAGCAGCAGTCGATGAGGTGGGAGATTGTCATGTTGTGAGTGCACATGTGTGTGACAAGCAGCAGTCGAGGGGGTGAGGGATTGCCATGCATCATTGATGGAATTGAGTGCGTGTGTCATGAGTGCGTGTGCCGGTGTGTGTGTGTGACAAGCAGCAGTAAAGGGGGTGGGGGATTGCCATGTTGGTGATGCCATCGAACAGGTGGGTCGTGAGCGTGCATGCATGCGTGCCGTGAACATCGAGGGGGTGGGGGATTACCATGCATCGTCGATGAAATCGAGTAGGTAGGTCGTGA ；

PP32087（143 bp），由SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列组成：

TAGTATTGTGGTGGTCATGGTGATCATTGTTGTCAATGTAGAGTCATGGTGGTCATGTTGACATGGTCATCATTGATGTTGCAGTCATGGTCATTGTGGGTGTGCATCATCCCAATATTGTGGTGCACAGGTATTGTCATCAA ；

PP85099（143 bp），由SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列组成：

TCGTGTTGCCATGTGAGGGTGTGTTTCATCCAGTTTTCGTCGTCACGCTTGTTGGTGGAGTATGTTAGATGGAAGAAAAGGATGAAGCGGATGTGAAAGACAGACCTCGGGATAGTCTTCGCGTGCGTGGGCACCACGAGATT ；

PP80085（143 bp），由SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列组成：

CACCACCACCACCACCACGACGTGAATGACGACGACGACCATCACCATCACCATCATCACCACGACGCGAACGAGAACGACGGCGACGACGACTACCACCACGACCACCACGCAAACGACGACAACGACTACTACGACTACCA ；

PP56123（349 bp），由SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列组成：

TGATCAACGTCCCTCTCGGTGGTAATGTACGACGACCTCCATACGTATCCGAGTCGCGTAAGTCTTCACCCCATGCAGTACGTATGCACAAGTAAGCGACGACTTCTTGCGAGACGTCGGAGCCGTTCTGGATCAGCCTTTCCGAGGACTTGATGATGATGATGATCGTTGCGTTGCGTTGGGGTTTCAAGTTATCAGATTATGTATGTAAGCGTGCGTAGATAGAATGTGGCGCATCCGCACCGCCATCGGATTGGAGAGTTGTTTCCTTTTTCTTCCACTTGTTCCCGTCCCCGCTCCCCCTATGTCATGCAG ；

PP76127（143 bp），由SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列组成：

ACTGCAGCGCTTGAGAAACCGTTGAATAAACCCCGGTTATAGGCGCAGACCGAAGAGACATGTTTGAACGTGCTAGATCGAGAGCCTGGCCGTGCCTCGCGGCATCTGTCGACATCTGACTCGCATCCAACTGAACGTCCGCA ；

PP57130（143 bp），由SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列组成：

CATTGATGGCAGTGACCCCTGGACTTGAGGGCAGCGACATGACAACAACAGCAATGATAGCAATGACAGCATATGGCCACCTTGTATCACCATCATCACCATGACCATCACACGATAATGACAATGACCTTGGCCATCACCAC ；

PP39117 (318 bp)，由SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列组成：

AGGCGCGTTGGATCGAACGTCGTGAACGTCGTCGTCGTCGCCGTCGAGGTGAGCCGTGCACTGTGCTGTCTATGCATGTCTGCTCTACTCTAGTGTCCGTTGTTTGATTATTCCGCATCTCTGCGATGGCGATGGCGATCACGCGTTATTATCATCATCATCATCATCCGTCCGTCCGTAAACTACAAGTGGACTTTGGACTTTGGATTGCTGATATCCATCCATCATCATGTTATTTATCTAGATAAACGAGTCTTTACGCGCTTGTTGGATACGCCGGTTTTAGAGGTCTCCGAGTCGGAGGGGGAGGCGGAGGAG ；

PP60130（312 bp），由SEQ ID NO:10所示的核苷酸序列组成：

AAACTAGCACTTACGCCGAACACCTTCCGGTCCTCGAGGATGTCACAGAGCGCGAGCAGGAATGTTTGGATGGGTTTGAGAGCCCTTCTTGCTCAGATTTTGGAGAACGCAACGCGAAGCCGTCTCTCTCCGTGTCTGCATCAATGGCGGTCTCTCTCTCTCCATCCGTTGCTTCATCCATCACAGCGGCGGGACTCGAGATAATGAGGATGGATGCCGACG

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说 明 书

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CCCAGGAACGCGCGCGGGAAAAGGAGAGAGAACGCGAAAGGGCTCGCGAGAGAGAACGTGAAACAAGGAAGGAGGGACAACACCAGCGCA ；

PP93120（312 bp），由SEQ ID NO:11所示的核苷酸序列组成：

GGACGTTTCTTAAAAGTCATGATAATGTTTAGCCTTCTGAGTTCTCATATCCAGATTGACATGTTATGTTCCAGTTGAAAACGAAGACATTGGGAGAAGGGGACCAATGATGGAAATCAAATAAATAACGCCGACATGGACATTTACCCCGCAGCAGCAGCAGCCCCGCTTGTGGCCAGCTTCTCACTGTAGCCCTGCGAAACAATCTCATTGACCTTATTTAGTGTCTCGAAACTCTCAGATGACGCTAATCGCCAACGTGGTCGGAGAAAACGACCCAAGTGACCAGATTCCATGTGCAGCTTCTGAAGT ；

PP23157（143 bp），由SEQ ID NO:12所示的核苷酸序列组成：

ACAGTGACGACAGCCATGGCCACCACTGTACCATCATGACCATGGCATCACGACAACGACTACGACAACAACAGCGACGACCATGATGACCACTACCACAACCACGACGATGCGAATGACGATGACAACGACAACTACCACTG ；

PP45160（312 bp），由SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列组成：

ACGCAACCATCTCCGTTCACTCCCGGCACCCACTTATCGCTCTTCCAGCCCCGTCTACGAGTACCCACTCAATGGCCAGTGGATCATGATGGACATCGACGACGGTTACATCCTCTGGACTGGCATCTGGAAAGGTATCCCTTGTCCTTCTCGTCGTCGTCGTTCTCCAGCTGATGACCTCTCCAGCCCTTGGCAATTCAAAAGGTATGCTCCGCCTCTGACTGCGGCGCGCGCCATGTCAACGCCACTCCTTACAGCTGATATCGTCAAGATGATCGATTCGCAGCCCGACTTGGCACCTGTTATCCGTCG ；

PP30156（312 bp），由SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列组成：

AGTTTTCTGACTGGCATGCATTCAGATTCTCCCTTAGAGAACCGTCCATAATATTGATGGTATGCGCTAGGCACCATCTCTTCTATAGTCTTTTCAAGCTTAGGAGGCGCCTCGATATTAGCACATATTGCATAGGCATGGTAGGCAGCCTCTTCTTCTTCTTTTTCCAAAACACGTAGGAATACACTCCTTTCCTTTAATAGATGGCAGCTTCTAGGGCACCTCGTCATCTTGACTTCGCCTTTAGACCAATCTATTTCGGGATTGTGCTTCTTTAGCCATGTGTAACCAAGGATGATCTGGTTACGTCCT ；

PP48147（143 bp），由SEQ ID NO:15所示的核苷酸序列组成：

GCTGTCCGAGATAAGATAAGATAAAGGGACTTAGACGTTTCTAAGTCAAAGGTCGTCAAATAATAGTGGAAAAATAGGGAAAAAAGTCATATCGTAACACATAGTACTAACACTATACCAACATATACTAGTCAGAGTCAGCA ；

上述SSR分子标记的引物序列分别为：PP50097-F：ATACGACCCTGTGTACTGCCATTC ；PP50097-R：AGTGCGATGAGTAAATTCGACGAC ；PP100-F：GAATTGAGTGCGTGTGTCATGAGT ；PP100-R：GTTCGATGGCATCACCAACAT ；PP32087-F：GCACAGGTATTGTCATCAACTTGG ；PP32087-R：GTCCATGTAACACTACCACCACCA ；PP85099-F：TGAAAGACAGACCTCGGGATAGTC ；PP85099-R：TTACTCCAGTGTGCTGTTCAAACC ；PP80085-F：ACGACTACTACGACTACCACCGC ；PP80085-R：TCATAGTCGTTATCGTTGTTCGTTG ；PP56123-F：GTACGTATGCACAAGTAAGCGACG ；PP56123-R：ATCTGATAACTTGAAACCCCAACG ；

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说 明 书

4/5页

PP76127-F：TGTTTGAACGTGCTAGATCGAGAG ；

PP76127-R：CCCTTCCTGGACTTGCATTATTAC ；PP57130-F：ATATGGCCACCTTGTATCACCATC ；PP57130-R：CTCAAGTGTGGGAGTTGCCTCTAT ；PP39117-F：AGTCTTTACGCGCTTGTTGGATAC ；PP39117-R：GGAGAGAAAATGGACTGACTTGGA ；PP60130-F：CCTTCTTGCTCAGATTTTGGAGAA ；PP60130-R：CCATCCTCATTATCTCGAGTCCC ；PP93120-F：GGGACCAATGATGGAAATCAAATA ；PP93120-R：TAAGGTCAATGAGATTGTTTCGCA ；PP23157-F：AATGATCATGACCACGACGATG 。[0007] PP23157-R：ACACTAATAGGAGTCGTCGTTCGC

PP45160-F：GTTACATCCTCTGGACTGGCATCTPP45160-R：ATATCAGCTGTAAGGAGTGGCGTTPP30156-F：TTAGCACATATTGCATAGGCATGGPP30156-R：GAAGCACAATCCCGAAATAGATTGPP48147-F：ATCATCATCATCATTCACAATGGGPP48147-R：CATGAACAATGGTGACAACAACAA本发明的有益效果在于：暗褐网柄牛肝菌SSR分子标记，建立技术体系，弥补其特异性分子标记的空白，为暗褐网柄牛肝菌遗传多样性，群体遗传学及种质鉴定研究提供有力的研究工具。附图说明

[0008]

附图1是基于15个SSR分子标记构建的西双版纳暗褐网柄牛肝菌遗传距离UPGMA

树。

具体实施方式

[0009] 实施例1：

1、暗褐网柄牛肝菌全基因组SSR扫描及引物设计将暗褐网柄牛肝菌PP33菌株基因组从头测序，拼装得到的scaffold文件作为输入文件，利用MISA进行全基因组SSR扫描,运用primer3，以被检测到的SSR上下游100 bp侧翼序列进行引物设计。引物设计的条件如下：最适长度24 bp；最短长度20 bp；最长长度28 bp；最适退火温度63℃；最低退火温度60℃；最高退火温度65℃；一对引物退火温度差的最大值为1℃。[0010] 2、暗褐网柄牛肝菌基因组DNA的提取和检测

取暗褐网柄牛肝菌干燥标本（约0.05克），置于1.5ml的离心管中，采用改进过的CTAB法提取基因组DNA（Xu et al. 1994）（1）：向上述加入标本的离心管中加入少许石英砂，再加入250μL的2×CTAB裂解液，用研磨棒进行充分研磨，直至呈匀浆状，再加入600μL的2×CTAB裂解液，颠倒混匀。（2）将装有研磨充分标本液的离心管置于65℃水浴1小时（其

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说 明 书

5/5页

间每10分钟翻转离心管1次）。（3）加入苯酚和氯仿各300μL，翻转离心管几次，13000 rpm离心10分钟。（4）收集上层水相，转至新的1.5mL离心管中。（5）重复(3)–(4)步2至3次，直至两相界面上无沉淀为止。（6）加入等体积的氯仿抽提一次，收集上层水相。（7）加入0.5–1倍体积预冷的异丙醇（或2倍体积的无水乙醇），4℃下13000rpm离心10分钟。（8）小心倒去上清液，将离心管扣压在干净的面巾纸上，吸干残留的上清液。（9）加入1mL预冷的75%乙醇，翻转离心管几次，13000rpm离心10分钟，弃除上清液，重复两次。（10）置于室温或真空系统中干燥。（11）加入50μL无菌水室温溶解，于-20℃保存备用。[0011] 电泳检测基因组DNA的提取情况：将提取的DNA样品与10×Loading Buffer（已加溴酚蓝）按10:1混合上样于1%的琼脂糖凝胶，于150V电压下电泳10分钟，并于紫外灯下检测。[0012] 3、SSR片段的PCR扩增反应

在上述全基因组SSR扫描及引物设计的结果中，随机从不同scaffold上挑选30对引物，并通过本地Blast检测这些引物在基因组中的专一性，合成引物时在正向引物加上不同的荧光标记。通过预实验后，选取多样性较好的15对引物对全部样品进行PCR扩增。[0013] 50μL的 PCR扩增反应体系为：50ng/μL的模板1μL；25mM的MgCl2 5μL；10mM的dNTPs 1μL；6μM的前、后引物各1μL；5U/μL 的DNA Taq酶0.2μL；10PCR反应缓冲液5μL；去离子水35.8μL。

[0014] PCR扩增反应使用降落PCR（Touchdown PCR）反应，反应程序为：95℃预变性5min，接下来94℃变性1min，60 ~ 52℃退火1 min，72℃延伸1min，一共进行35个循环，最后72℃延伸10min。扩增产物上样，用1.0%的琼脂糖凝胶、1×TBE电泳液中电泳检测，PCR产物送北京六合华大基因科技有限公司进行基因分型。[0015] 4、基于SSR数据的遗传多样性分析

对来自西双版纳的68个暗褐网柄牛肝菌样品进行遗传多样性分析。将SSR二元数据输入DPS软件，以Jicard方法进行遗传距离的计算，并将计算结果输入MEGA 5.2进行UPGMA树的构建。

[0016] 在全部样品中15个SSR位点（具体同发明内容部分所述）的分型结果显示，每个位点的等位基因数目为2 ~ 7个，平均3.6个，期望杂合度的总平均值为0.397，观测杂合度的总平均值为0.552，多态性较高。[0017] 结果表明，如图1所示，全部样品在UPGMA树上都成的分支，15个位点中的多态性信息已经能够把68个样品都区分开，说明这些引物在检测群体中能够为提供足够的多样性，能够用于后续的遗传多样性、群体遗传学及种质鉴定研究。

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序 列 表

SEQUENCE LISTING<110> 云南省热带作物科学研究所,云南大学<120> 暗褐网柄牛肝菌SSR分子标记<130> 2015<160> 15

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 143<212> DNA

<213> 暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）

<400> 1

accaagtttt tccccactcc cttctcaaag cccccttcac ccacttactt acgagggccg 60gcgggagcaa ttcaagatgg tagggtgata tttcaccaga tcgcgtgagc tcatacgacc 120ctgtgtactg ccattcgttg gcc 143

<210> 2<211> 312<212> DNA

<213> 暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）

<400> 2

atgtgatgat gaagtcaagc agcagtcgat gaggtgggag attgtcatgt tgtgagtgca 60catgtgtgtg acaagcagca gtcgaggggg tgagggattg ccatgcatca ttgatggaat 120tgagtgcgtg tgtcatgagt gcgtgtgccg gtgtgtgtgt gtgacaagca gcagtaaagg 180gggtggggga ttgccatgtt ggtgatgcca tcgaacaggt gggtcgtgag cgtgcatgca 240

9

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序 列 表

2/7页

tgcgtgccgt gaacatcgag ggggtggggg attaccatgc atcgtcgatg aaatcgagta 300ggtaggtcgt ga 312

<210> 3

<211> 143<212> DNA

<213> 暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）

<400> 3

tagtattgtg gtggtcatgg tgatcattgt tgtcaatgta gagtcatggt ggtcatgttg 60acatggtcat cattgatgtt gcagtcatgg tcattgtggg tgtgcatcat cccaatattg 120tggtgcacag gtattgtcat caa 143

<210> 4<211> 143<212> DNA

<213> 暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）

<400> 4

tcgtgttgcc atgtgagggt gtgtttcatc cagttttcgt cgtcacgctt gttggtggag 60tatgttagat ggaagaaaag gatgaagcgg atgtgaaaga cagacctcgg gatagtcttc 120gcgtgcgtgg gcaccacgag att 143

<210> 5<211> 143<212> DNA

<213> 暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）

<400> 5

caccaccacc accaccacga cgtgaatgac gacgacgacc atcaccatca ccatcatcac 60

10

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序 列 表

3/7页

cacgacgcga acgagaacga cggcgacgac gactaccacc acgaccacca cgcaaacgac 120gacaacgact actacgacta cca 143

<210> 6

<211> 315<212> DNA

<213> 暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）

<400> 6

tgatcaacgt ccctctcggt ggtaatgtac gacgacctcc atacgtatcc gagtcgcgta 60agtcttcacc ccatgcagta cgtatgcaca agtaagcgac gacttcttgc gagacgtcgg 120agccgttctg gatcagcctt tccgaggact tgatgatgat gatgatcgtt gcgttgcgtt 180ggggtttcaa gttatcagat tatgtatgta agcgtgcgta gatagaatgt ggcgcatccg 240caccgccatc ggattggaga gttgtttcct ttttcttcca cttgttcccg tccccgctcc 300ccctatgtca tgcag 315

<210> 7<211> 143<212> DNA

<213> 暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）

<400> 7

actgcagcgc ttgagaaacc gttgaataaa ccccggttat aggcgcagac cgaagagaca 60tgtttgaacg tgctagatcg agagcctggc cgtgcctcgc ggcatctgtc gacatctgac 120tcgcatccaa ctgaacgtcc gca 143

<210> 8

11

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序 列 表

4/7页

<211> 143

<212> DNA

<213> 暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）

<400> 8

cattgatggc agtgacccct ggacttgagg gcagcgacat gacaacaaca gcaatgatag 60caatgacagc atatggccac cttgtatcac catcatcacc atgaccatca cacgataatg 120acaatgacct tggccatcac cac 143

<210> 9<211> 318<212> DNA

<213> 暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）

<400> 9

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<213> 暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）

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CN 104946763 A

序 列 表

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<213> 暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）

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<213> 暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）

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<213> 暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）

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<213> 暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）

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<213> 暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）

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说 明 书 附 图

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图1

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