《兽医临床综合实践（一）
---兽医临床诊断学》
实 验 报 告
动物科学学院动物医学专业2008级
姓名 学 号 指导教师 黄志坚 开课学期 2010至 2010学年 第一学期
动物科学实验教学中心编印
二0一0年九月
实验一：实验预习报告
实验名称 血清生化指标的测定 实验时间 一、实验目的和要求 了解和掌握血清某些生化指标（总蛋白、丙氨酸氨基转移酶）的测定原理、方法；进一步熟悉血液生化分析仪的应用。 二、实验原理 1、总蛋白测定法-双缩脲法 蛋白质多肽链中的肽键（-CONH-，甲酰胺基在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与铜离子作用，形成紫红色的复合物。在波长540nm处有最大吸收，所产生的复合物颜色与蛋白质的浓度成正比。通过与同样处理的蛋白质标准液相比较，可求出血清总蛋白的浓度。 这个反应与蛋白质的-R基无关，也与蛋白质的分子量无关，血清中各种蛋白质显色程度基本相同，只要严格控制反应条件（如pH、反应温度等），是血清蛋白测定的理想方法。 2、丙氨酸氨基转移酶测定-酶偶连续检测法 在丙氨酸氨基转移酶（ALT）的催化下，丙氨酸的氨基转移到α-酮戊二酸，生成丙酮酸及谷氨酸。丙酮酸与还原型辅酶Ⅰ（NADH）在LDH的催化下反应生成乳酸和氧化型辅酶Ⅰ（NAD） 。NADH在波长340nm有特异吸收峰，其氧化的速率与血清中ALT的活性成正比，在340nm处测定NADH吸光度下降的速率，即可计算出ALT活性。 +三、实验材料 1、总蛋白检测试剂盒 2、丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒3、XD-811L半自动生化分析仪； 4、小试管；5、水浴仪6、20μl、1ml移液器7、定时器8、蒸馏水 四、实验试剂 五、实验过程（简单过程） 1、开机 打开电源开关，仪器预热30分钟左右。 2、仪器初始化 按橙色的“start”键，吸入蒸馏水，仪器初始化，在不同的波长下，2次蒸馏水的吸光度之差若在0.002以内，仪器初始化成功，按任意键，仪器进入“功能选择”界面。 3、样品的预处理 注意事项 1.试剂中含有防腐剂和和稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。一旦接触，即用大量清水冲洗。请勿吞服。 2.试剂与样本的用量 空白 标准管 样本管 管 1000 可按比例改变。 3.高脂或者黄疸标本在340nm处有较强吸收峰，这些标本中高水平 20 的ALT会导致底物耗尽而在340nm仍然维总蛋白试剂（ µL ） 1000 1000 37℃孵育10分钟 蒸馏水（ µL ） 20 标准品（ µL ） 样本（ µL ） 混匀，37℃孵育10分钟，检测。 4、编辑 移动鼠标点击【编辑】按钮，进入【项目编辑】界面，选中【总蛋白】，按【编辑】按钮，弹出【编辑】对话框，根据总蛋白测定试剂盒使用说明书编辑如下： 持高光度吸收值，此时 20 样品应该稀释后再测试。 4.在延迟时间内，样本中高丙酮酸含量会消耗NADH，从而降低测试的线性。 项目名称—总蛋白；方法—终点法；波长1—545nm、波长2—N0； 5.试剂中含有防腐剂和空白—试剂空白；标准— √， 点击【标准值】按钮，弹出【标准值输入】对话框： 填写：标准数量—1，重复数目—2，曲线类型—线性，标准值：1. 70.00 ，其余皆为0.00， 填写完后，按【标准值输入】对话框中的【确定】按钮，退和稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。一旦接触，即用大量清水冲洗。请勿吞出该对话框；单位—g/L；小数—2；延迟时间—5秒；吸液量—600µL；服。 填写完上述参数后，按【确定】按钮，弹出【参数保存】对话框，点击【保存】按钮，编辑完成并返回【项目编辑】界面，按此菜单中的【返回】按钮，返回【功能选择】界面。 5、测试 移动鼠标点击【测试】按钮进入【测试】界面。依次测蒸馏水、空白液，测完后，仪器显示测样品液，此时要移动鼠标，点击【标准】按钮，仪器显示准备测试第1点标准、第2点标准，标准测完后，弹出【标准曲线】对话框，显示此次标准曲线和仪器已存的标准曲线，如要保留此次标准曲线，则按【确定】按钮，样品总蛋白含量则以此标准换算，否则按【取消】按钮，不保存此次标准曲线，样品总蛋白含量将以已保存的标准换算。测试样品。 6、清洗 样本测试完后，用专用的半自动生化分析仪清洁液浸泡15分钟左右，反复用蒸馏水清洗，直至洗出液清亮透明为止。 7、关机 返回“功能选择”界面，关机。 二、丙氨酸氨基转移酶检测 1、开机 打开电源开关，仪器预热30min左右。 2、仪器初始化 按橙色的【start】键，吸入蒸馏水，仪器初始化，在不同的波长下，2次蒸馏水的吸光度之差若在0.002以内，仪器初始化成功，按任意键，仪器进入【功能选择】界面。 3、编辑 移动鼠标点击【编辑】按钮，进入【项目编辑】界面，选中【丙氨酸氨基转移酶】按【编辑】按钮，弹出【编辑】对话框，根据丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒使用说明书编辑如下： 项目名称—丙氨酸氨基转移酶； 方法—动态法；波长1—340nm； 因素— √，因素值—-3376（不同厂家的试剂因素值可能不一样）； 单位—U/L；小数—2；延迟时间—60秒；读数时间—90秒； 吸液量—600µL； 填写完上述参数后，按【确定】按钮，弹出【参数保存】对话框，点击【保存】按钮，编辑完成并返回【项目编辑】界面，按此菜单中的【返回】按钮，返回【功能选择】界面。 4、测试 移动鼠标点击【测试】按钮进入【测试】界面。蒸馏水测完后，测样品。取50 µL血清（血浆），加入1000 µL工作液，混匀，即测，记录结果。 5、清洗 样本测试完后，用专用的半自动生化分析仪清洁液浸泡15min左右，反复用蒸馏水清洗，直至洗出液清亮透明为止。 6、关机 返回【功能选择】界面，关机。 六：实验结果计算 实验预习报告评阅意见 教师签名 年 月 日
实验一：实验结果的记录、数据及分析 一、实验现象观察记录 二、实验原始数据和计算 三、实验结束后仪器的整理、玻璃器械的清洗情况 实验教师签名： 四、实验结果分析与讨论（包括实验现象的解释、成败原因和改进措施等） 五、实验的体会 教师评阅成绩 教师签名 年 月 日
因篇幅问题不能全部显示，请点此查看更多更全内容