第ｌ９卷第３期 云南民族大学学报（自然科学版） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｙｕｎｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｖ ．１９ Ｎｏ．３ Ｍａｖ ２０１０ ２０１０年５月 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—８５１３．２０１０．０３．０１２ 混合粉剂扑草净和乙草胺的反相高效液相色谱分析 王德海 ，谭伟 ，吴晓波 ，王红斌 （１．云南省农药检定所，云南昆明６５００３４；２．云南民族大学化学与生物技术学院，云南昆明６５０５００） 摘要：采用反相高效液相色谱法测定混剂中的扑草净、乙草胺的含量．使用ｃ 不锈钢柱（５ ｍ， １５０ Ｌ×４．６ ｍｍ），以乙腈一水（体积比为７０：３０）为流动相，检测波长２１５ ｎｍ．结果表明：该方法测 得扑草净、乙草胺相对标准偏差为０．２８％，０．２１％；线性相关系数为０．９９９ ９，０．９９９ ７；回收率为 １００．１％，９８．９％．方法简便，结果准确，重现性好． 关键词：扑草净；乙草胺；反相高效液相色谱 中图分类号：０６５７．７ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２—８５１３（２０１０）０３—０１９８—０３ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｍｉｘｔｕｒｅ ｏｆ Ｐｒｏｍｅｔｒｙｎ ａｎｄ Ａｃｅｔｏｃｈｌｏｒ ｂｙ ＲＰ——ＨＰＬＣ ＷＡＮＧ Ｄｅ—ｈａｌ ，ＴＡＮ Ｗｅｉ ，ＷＵ Ｘｉａｏ—ｂｏ ，ＷＡＮＧ Ｈｏｎｇ—ｂｉｎ （１．Ａ ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｙｕｎｎａｎ，Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５００３４，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｅｈｎｏｌｏｇｙ，Ｙｕｎｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５０５００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｉｘｔｕｒｅ ｏｆ ｐｒｏｍｅｔｒｙｎ ａｎｄ ａｅｅｔｏｃｈｌｏｒ ｂｙ ＲＰ ～ＨＰＬＣ．Ｔｈｅ ｃｈｒｏｍａｔ０ｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｌｕｍｎ ｗａｓ Ｃｌ８ ｃｏｌｕｍｎ（５ ｐ，ｍ，１５０ Ｌ Ｘ ４．６ ｍｍ）．Ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗａｓ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ ｗａｔｅｒ（７０：３０）：ｔｈｅ ｕＶ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ａｔ ２１５ ｎｍ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａ． —ｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ０．２８％ａｎｄ ０．２１％，ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ０．９９９ ９ ａｎｄ ０．９９９ ７．ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｗｅｒｅ １００． １％ａｎｄ ９８．９％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉＳ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ．ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｉＳ ｓｔａｂｌｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｒｏｍｅｔｒｙｎ；ａｃｅｔｏｃｈｌｏｒ；ｒｅｖｅｒｓｅｄ—ｐｈａｓｅ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ 扑草净为选择性内吸传导型三氮苯类除草剂， 相对较少．本文研究了２０％扑草净・乙草胺粉剂的 主要通过植物根部吸收，靠抑制光合作用达到除草 目的；乙草胺为选择性芽前酰胺类除草剂，能被杂草 的幼芽和幼根吸收，靠抑制蛋白质的合成使杂草死 亡¨ ．２０％扑草净・乙草胺粉剂是两者科学复配而 成，具有除草效果好、杀草谱广、用量少等特点，深受 用户欢迎，但目前对混剂的质量分析主要按单个成 分进行＿２。ｊ，操作复杂，效率低，因此研究对混剂中 ２种有效成分同时在线分析的方法意义重大．对扑 反相高效液相色谱分析方法，实现了两者的有效分 离，操作简便、快速，结果准确、重复性好． １ 实验部分 １．１试剂和溶液 乙腈、甲醇：色谱纯；水：超纯水；扑草净标样 （昆明农药有限公司）；乙草胺标样（云南师范大学 农药研究所）；试样：２０％扑草净・乙草胺粉剂（云 南师范大学农药研究所）． １。２仪器 草净・乙草胺混剂的有效成分分析方法有气相色谱 法 Ｊ、正相高效液相色谱 ．有关反相高效液相色 谱在农药质量分析中的应用报道较多 卜ｍ ，但对扑 草净和乙草胺混剂的反相高效液相色谱分析的报道 岛津ＬＣ２０Ａ，配有岛津可见一紫外分光光度 计；色谱柱：Ｃ】８柱，５ ｍ，１５０ Ｌ×４．６ ｍｍ（Ｓｈｉｍａｄ一 收稿日期：２００９—１０—１０． 基金项目：同家自然科学基金（６０９６３０２６）；云南省社会发展科技（应用基地研究）项目（２０９ＣＤ１００） 作者简介：王德海（１９７１一），男，硕士研究生．主要研究方向：农药市场监管及农药质量分析． 通讯作者：王红斌（１９６６一），男，教授．主要研究方向：环境化学． 第３期 王德海，谭伟，吴晓波，等：混合粉剂扑草净和乙草胺的反相高效液相色谱分析 １９９ ＺＵ）；天津奥特赛恩斯ＡＳ３１２０型超声波清洗器，梅 中扑草净（乙草胺）质量分数Ｘ （％），按式（１）计算． 特勒一托利多ＡＢ１０４一Ｓ分析天平，艾科浦微量无 机型超纯水机． １．３色谱条件 流动相（乙腈：水＝７０：３０）；流量：１ ｍＬ／ｍｉｎ；柱 温：３５℃；检测波长：２１５ ｎｍ；进样体积：５ ；保留 时间：扑草净约４．２９ ｍｉｎ，乙草胺约４．９８ ｍｉｎ． 上述色谱条件，系典型操作参数，可根据不同仪 器的特点，对给定操作参数作适当调整，以期获得最 佳结果．在此条件下，扑草净和乙草胺标样、试样高 效液相色谱图见图１和图２． ６００ ５００ ４００ ３００ ２００ ｌＯ０ ０ … －｛——————————一 １．Ｏ ２．０ ３．０ ４．０ ５．０ ６．Ｏ ｔ／ｍｉｎ 】：ｔｂ草净；２：乙草胺 图１扑草净、乙草胺标样高效液相色谱图 【ｌ￣ｔｅｅｔｏｒＡ ］Ｓｎｍ 一 ２０００ｆ １５００｝ 》 ｝ｇ １００｝ ５００Ｉ［ 【 。 ０Ｉ＝＿＿＿二＝＝＝：＝工：二二：：：二二二二二＝：：＝ｌ二．：工 二：：＝二＝ 二：二． ：＝：：：＝＝：＝ １．０ ２．０ ３．０ ４．０ ５．０ ６．０ ｔ／ｍｉｎ １：扑草净；２：乙草胺 图２扑草净、乙草胺试样高效液相色谱图 １．４测定步骤 １）标样溶液的配制：准确称取扑草净、乙草胺 标样各０．０３ ｇ（精确至０．１ ｍｇ），置于２５ ｍＬ容量瓶 中，用甲醇稀释定容，摇匀备用． ２）试样溶液的配制：准确称取试样０．０８ ｇ（精确 至０．１ ｍｇ），置于２５ ｍＬ容量瓶中，用甲醇稀释定 容，超声波助溶２ ｍｉｎ，０．４５ ｍ滤膜过滤备用． ３）测定：在上述色谱操作条件下，待仪器稳定 后，连续注入数针标样溶液，计算各针色谱峰的重现 性，相邻两针的相对变化＜１．５％后，按照标样溶液、 试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定． ４）计算：将测得的２针试样溶液以及试样前后２ 针标样溶液中扑草净（乙草胺）峰面积进行平均．试样 ， （１） 式中： ，一标样溶液中，扑草净（乙草胺）峰面积的 平均值； ，一试样溶液中，扑草净（乙草胺）峰面积的 平均值； ｍ。一标样的质量（ｇ）； ｍ 一试样的质量（ｇ）； Ｐ一标样中扑草净（乙草胺）的质量分数（％）． ２结果与讨论 ２．１色谱条件的选择 用岛津ＬＣ一２０Ａ型高效液相色谱仪所配紫外检 测器对相同条件下分离后的扑草净、乙草胺在１９０～ ３７０ ｎｍ波长范围内进行扫描，得到各农药的紫外一可 ０ Ｏ Ｏ ０舳加∞如∞如加ｍ Ｏ ０ Ｏ ０ ０ Ｏ见吸收光谱图，如图３、４所示．从图中可以看出在１９０ ～３７０ ｎｍ范围内，扑草净的最大吸收波长在２２０ ｎｍ 附近，乙草胺的最大吸收波长在２００ ｎｍ附近．以２２０ ｎｍ波长为检测波长时，乙草胺的响应过低；而以２００ ｌｑｌＴｌ波长为检测波长时，溶剂干扰较大，综合考虑，选 定２１５ ｎｍ作检测波长可以克服以上困难． ２００ ２５０ ３００ ３５０ ￣，／ｎｍ 图３扑草净紫外吸收曲线 … … … ” 川ｕｕ 川 ２００ ２５０ ３００ ３５０ 九／ｎｍ 图４乙草胺紫外吸收曲线 云南民族大学学报（自然科学版） 第１９卷 根据扑草净、乙草胺的理化性质，选择ＯＤＳ— Ｃ， 为分析柱；先后考虑了以甲醇一水、甲醇一水（冰 质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制线性相 关曲线，如图５所示，得扑草净的线性方程为Ｙ＝ ３８．５５９ｘ＋０．１４０ ５，相关系数，＝０．９９９ ９；乙草胺的 线性方程为Ｙ＝２３．８５８ｘ一０．２０８ ７，相关系数ｒ ＝乙酸）为流动相，前者分离度不好，后者虽能分离， 但乙草胺的峰型不好，而以乙腈一水为流动相在保 证较好分离的同时获得了较好的峰型．经优化， （乙腈）：Ｖ（水）＝７０：３０，流速为ｌ ｍＬ／ｍｉｎ时，扑草 净、乙草胺分离较好，且无杂质干扰． 表１分析方法线性相关性实验结果 ０．９９９ ７． 质量浓度／（ｍｇ・ ） 扑草净・乙草胺 ・图５扑草净、乙草胺线性关系图 ２．３分析方法的精密度 选同一批次的２０％扑草净・乙草胺粉剂试样， 在上述色谱操作条件下平行测定５次，分３天测Ｅｔ ２．２方法的线性关系考察 间精密度，如表２所示测定结果，得扑草净、乙草胺 的相对标准偏差分别为０．２８％、０．２１％，Ｅｔ间精密 度分别为１．０２％和１．４５％． ％ 分别配制５个不同浓度的扑草净．乙草胺标样 准溶液，在上述色谱操作条件下测定，得响应值，以 表２分析方法精密度实验结果 ２．４分析方法的准确度 下，测得扑草净、乙草胺的回收率分别为１００．１％、 ９９．３％，如表３所示． 分别称取已知含量的２０％扑草净．乙草胺粉剂 试样，准确加入所配标准溶液，在上述色谱操作条件 表３分析方法的准确度测定结果 ３ 结论 上述试验结果表明，本方法具有较高的分离度， 方法简便、快速，精密度、准确度能满足产品质量检 测 ，可以用于产品的质量分析． 参考文献： ［１］高希武，郭艳青，王恒亮，等．新编实用农药手册［Ｍ］．郑 州：中原农民出版社，２００２． ［２］中化化工标准化研究所．农药标准汇编（产品卷） ＨＧ２２０１—９１［Ｍ］．北京：中国标准出版社，２００６． （下转第２０６页） ２０６ 云南民族大学学报（自然科学版） 进展，２０００，２７（６）：６５８—６６１． 第１９卷 自由基能力的大小顺序为：抗坏血酸、硫脲、丁香、金 银花、芦荟、甘草、丹参、黄芩． ［５］周嘉伟．衰老的自由基学说与抗衰老中药的研究［Ｊ］． 天津药学，１９９７，９（２）：４１—４４． ［６］陈听映，莫椒茜．茶多酚——优良的抗氧化自由基清除 ３结语 通过测定芦荟、丹参、黄芩、金银花、甘草、丁香 ６种天然药物和抗坏血酸、硫脲２种纯药对ＤＰＰＨ 剂［Ｊ］．茶叶，１９９８，２４（４）：２１７—２１８． ［７］郑德勇，安鑫南．丛生竹叶提取物的成分与清除自由基 的能力［Ｊ］．福建林学院学报，２００４，２４（３）：１９３—１９６． ［８］贝玉祥，郭英，范逸平，等．诃子多酚清除活性氧自由基 及体外抗氧化作用研究［Ｊ］．云南民族大学学报：自然 科学版，２００９，１８（１）：５１—５４． 自由基的清除率，并比较清除率曲线可以得出：抗坏 血酸、硫脲、丁香３种药物对ＤＰＰＨ自由基的消除效 果要好于其他药物，丁香因其为天然药物，可以作为 一种安全、无毒的抗氧化剂来使用． ［９］彭长连，陈少薇．用清除有机自由基法评价植物抗氧化 参考文献： ［１］黄春．黄酮类化合物在不同氧化体系中的抗氧化作用 研究［Ｊ］．食品与发酵工业．１９９６，（３）：４６—５３． 能力［Ｊ］．生物化学与生物物理进展，２０００，２７（６）：６５８ —６６１． ［１Ｏ］郑德勇，安鑫南．竹叶提取物清除ＤＰＰＨ自由基的测定 方法［Ｊ］．福建农林大学学报：自然科学版，２００５，３４ （１）：５９—６２． ［２］张德权．生物类黄酮的研究及应用概况［Ｊ］．食品与发 酵工业，１９９９，（６）：５２—５７． ［３］ＨＡＬＬＩＷＥＬＬ、Ｂ，ＧＵＴＩ＇ＥＲＩＤＧＥ Ｊ Ｍ Ｃ．Ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌｓ ｉｎ ｂｉ— ［１１］刘栋，钱建亚，翁利珍．甘薯水溶性紫色素清除ＤＰＰＨ 自由基活性研究［Ｊ］．食品科技，２００３，（１２）：５０—５２． ［１２］许宗运，马少宾，张秀萍．ＤＰＰＨ－法评价３７种植物抗氧化 活性［Ｊ］．塔里木农垦大学学报，２００４，１６（２）：１—４． （责任编辑王琳） ｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｍｅｄｉｃｉｎｅ［Ｍ］．Ｏｘｆｏｒｄ：Ｃｈａｒｅｎｄｏｎ ｐｒｅｓｓ，１９８５． ［４］彭长连，陈少薇，林植芳，等．用清除有机自由基ＤＰＰＨ 活性法评价植物抗氧化能力［Ｊ］．生物化学与生物物理 七 七七七 电 电 －６＇ 电七七 七 七 （上接第２００页） ［３］中化化工标准化研究所．农药标准汇编（产品卷）ＨＧ２４６５．１～９３—９１［Ｍ］．北京：中国标准出版社，２００６． ［４］胡存中，许如芳．乙草胺・扑草净复配制剂的气相色谱分析［Ｊ］．世界农药，２００６，２８（４）：４９—５１． ［５］丁夏萍，唐惠敏，潘康标．４０％乙草胺・扑草净可湿性粉剂的气相色谱分析方法研究［Ｊ］．现代农药，２００２，（１）：２１—２２ ［６］谢笑天，郑萍，杨明慧．扑草净、乙草胺混配除草剂的ＨＰＬＣ分析方法［Ｊ］．分析实验室，２００２，２１（４）：４６—４８． ［７］李薇，徐晖，孙铁刚，等．５０％多菌灵．福美双可湿性粉剂高效液相色谱分析［Ｊ］．分析试验室，２００８，２７（２）：９２—９５． ［８］刘丽华．２０％杀扑磷・毒死蜱乳油高效液相色谱分析［Ｊ］．农药，２００７，４６（１１）：７６３—７６４． ［９］胥璋．２０％噻嗪酮・杀扑磷乳油的液相色谱分析［Ｊ］．世界农药，２００８，３０（２）：４—４６． ［１０］黄永忠，魏东，杨彩玲．１５％福美双・吡虫啉・烯唑醇悬乳种衣剂的ＲＰ—ＨＰＬＣ分析［Ｊ］．２００８，４７（２）：１１４—１１５． （责任编辑王琳）