伏立康唑与布地奈德联用抗白色念珠菌的作用研究

伏立康唑与布地奈德联用抗白色念珠菌的作用研究

郝丽娜１ꎬ陈小雪２ꎬ李秀云１

(１.山东大学齐鲁儿童医院ꎬ山东济南２５００２２ꎻ２.青岛大学附属医院ꎬ山东青岛２６６０００)

摘要:目的　研究伏立康唑与布地奈德联用的体内、外抗白色念珠菌活性ꎮ方法　采用微量稀释法测定两药联用的体外抗真菌作用ꎬ并以部分抑菌浓度指数模型和生长差异百分率模型共同地评价两药联合抗真菌作用效果ꎮ使用大蜡螟作为感染模型ꎬ通过测定感染后大蜡螟的生存率、载菌量和组织病理学改变综合评价两药联用在体内的疗效ꎮ结果　与对照组和药物单用组相比ꎬ两药联用对耐药白色念珠菌有明显的体外协同作用ꎬ但对敏感白色念珠菌无体外协同作用ꎮ与对照组和药物单用组相比ꎬ两药联用可显著提高感染耐药白色念珠菌的大蜡螟的生存率(Ｐ<０.０５)、降低载菌量(Ｐ<０.０５)并减少组织破坏ꎬ但两药联用对感染敏感白色念珠菌的的大蜡螟的生存率、载菌量、组织病理学均无显著影响ꎮ结论　两药联用对耐药白色念珠菌有显著的体内、外协同作用ꎮ

关键词:伏立康唑ꎻ布地奈德ꎻ耐药ꎻ白色念珠菌

中图分类号:Ｒ９７８.５　文献标识码:Ａ　文章编号:２０９５－５３７５(２０１９)０３－０１４４－００５ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０１９.０３.００４

ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｖｏｒｉｃｏｎａｚｏｌｅａｎｄｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅａｇａｉｎｓｔＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ

ＨＡＯＬｉｎａ１ꎬＣＨＥＮＸｉａｏｘｕｅ２ꎬＬＩＸｉｕｙｕｎ１

(１.ＱｉｌｕＣｈｉｌｄｒｅｎ′ｓＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＪｉｎａｎ２５００２２ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＱｉｎｇｄａｏＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＱｉｎｇｄａｏ２６６０００ꎬＣｈｉｎａ)

Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅａｎｔｉｆｕｎｇａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆｖｏｒｉｃｏｎａｚｏｌｅ(ＶＲＣ)ｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ(ＢＵＤ)ａ￣

ｇａｉｎｓｔＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓｉｎｖｉｖｏａｎｄｉｎｖｉｔｒｏ.Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＴｈｅｉｎｖｉｔｒｏａｎｔｉｆｕｎｇａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆｖｏｒｉｃｏｎａｚｏｌｅｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅａｇａｉｎｓｔＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙａｂｒｏｔｈｍｉｃｒｏｄｉｌｕｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ.Ｆｒａｃｔｉｏｎａｌｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｄｅｘ(ＦＩＣＩ)ｍｏｄｅｌａｎｄｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｇｒｏｗｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ(△Ｅ)ｍｏｄｅｌｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｉｎｔｅｒｐｒｅｔｔｈｅａｎｔｉｆｕｎｇａｌｅｆｆｅｃｔｓｉｎｖｉｔｒｏ.ＵｓｉｎｇＧａｌｌｅｒｉａｍｅｌｌｏｎｅｌｌａａｓｔｈｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｍｏｄｅｌꎬｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅｓꎬｆｕｎｇａｌｂｕｒｄｅｎａｎｄｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙｏｆｉｎｆｅｃｔｅｄｌａｒｖａｅｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｉｎｖｉｖｏａｎｔｉｆｕｎｇａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆｖｏｒｉｃｏｎａｚｏｌｅｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ.Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＣｏｍｐａｒｅｄｔｏｃｏｎｔｒｏｌａｎｄｄｒｕｇａｌｏｎｅｇｒｏｕｐｓꎬｔｈｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｖｏｒｉｃｏｎａｚｏｌｅａｎｄｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅｈａｄｅｆｆｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｔＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓｉｎｖｉｔｒｏꎬｗｈｉｌｅｎｏｓｙｎｅｒｇｅｔｉｃｅｆｆｅｃｔｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｆｏｒｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ.Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅꎬｔｈｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｖｏｒｉｃｏｎ￣ａｚｏｌｅａｎｄｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｍｐｒｏｖｅｄｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅｓ(Ｐ<０.０５)ꎬｒｅｄｕｃｅｆｕｎｇａｌｂｕｒｄｅｎ(Ｐ<０.０５)ａｎｄｒｅｄｕｃｅＧａｌｌｅｒｉａｍｅｌｌｏｎｅｌｌａｉｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＶｏｒｉｃｏｎａｚｏｌｅｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅｈａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｓｙｎｅｒｇｅｔｉｃｅｆｆｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｔＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓｉｎｖｉｖｏａｎｄｉｎｖｉｔｒｏ.

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＶｏｒｉｃｏｎａｚｏｌｅꎻＢｕｄｅｓｏｎｉｄｅꎻＲｅｓｉｓｔａｎｃｅꎻＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ

ｔｉｓｓｕｅｄａｍａｇｅｏｆＧａｌｌｅｒｉａｍｅｌｌｏｎｅｌｌａｉｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｒｅｓｉｓｔａｎｔＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓꎬｗｈｉｌｅｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｅｆｆｅｃｔｗａｓｆｏｕｎｄｉｎ

　　白色念珠菌耐药性的出现给临床抗感染带来极研究热点[３]ꎮ伏立康唑作为新一代三唑类抗真菌患者重症感染时ꎬ布地奈德与抗真菌药物有联合应

大挑战[１－２]ꎮ联合用药抗耐药真菌是近年来的国际药ꎬ已成为治疗白色念珠菌感染的一线药物[４]ꎮ在

用机会ꎮ本研究旨在借助大蜡螟感染模型、微量稀１　材料

释法测定两药联用的体内、外抗白色念珠菌作用ꎮ

１.１　菌株　实验菌株:敏感白色念珠菌２株(ＣＡ４、ＣＡ８)和耐药白色念珠菌２株(ＣＡ１０、ＣＡ１６)ꎬ山东省

　基金项目:２０１７年济南市卫生和计划生育委员会科技计划项目(Ｎｏ.２０１７－２－２０)

　作者简介:郝丽娜ꎬ女ꎬ博士研究生ꎬ主管药师ꎬ研究方向:抗感染ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｈａｏｌｉｎａ１９８４＠１６３.ｃｏｍ

药学研究􀅰ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ２０１９Ｖｏｌ.３８ꎬＮｏ.３􀅰１４５􀅰

千佛山医院临床分离ꎮ质控菌株:白色念珠菌１.２　药品与主要试剂　伏立康唑(大连美仑生物技(ＡＴＣＣ１０２３１)ꎬ山东大学药学院药理实验室惠赠ꎮ

通过ΣＳＹＮ(９６孔板中所有正值△Ｅ的加和)与ΣＡＮＴ(９６孔板中所有负值△Ｅ的加和)的加和指标来判断两药的相互作用ꎮ当ΣＳＹＮ(正值△Ｅ之总和)与ΣＡＮＴ(负值△Ｅ之总和)相加为正值时ꎬ表示伏立康唑与布地奈德对白色念珠菌有协同作用ꎬ为负值时ꎬ表示伏立康唑与布地奈德对白色念珠菌有拮抗作用(弱的拮抗或协同作用:｜ΣＳＹＮ＋

术有限公司)ꎻ布地奈德(美仑生物技术有限公司)ꎻ苯唑西林钠(大连美仑生物技术有限公司)ꎻＲＰＭＩ１６４０药粉(北京拜耳生物技术有限公司)ꎻ３－(Ｎ－吗啉代)－２－羟基丙磺酸(ＭＯＰＳꎬ北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司)ꎻ磷酸盐缓冲液(ＰＢＳꎬ北京欣华绿源科技有限公司)ꎻＰＡＳ染色试剂盒(烟台赛尔斯生物技术有限公司)ꎻ３ꎬ３′－[１－(苯氨酰基)－３ꎬΣＡＮＴ｜<１００％时ꎬ中等的拮抗或协同作用:１００％≤｜ΣＳＹＮ＋ΣＡＮＴ｜≤２００％ꎬ强的拮抗或协同作用:｜ΣＳＹＮ＋ΣＡＮＴ｜>２００％)ꎮ所有实验在相同实验条

(ＸＴＴꎬ４－四氮美国唑]Ｓｉｇｍａ－二(公司４－甲)ꎮ

氧基－６－硝基)苯磺酸钠１.３　生物科技有限公司昆虫感染模型１.４　净工作台仪器　Ｇ－５６０Ｅ)ꎮ

　大蜡螟适龄幼虫(天津惠裕德涡旋混合器(ＭＭＭＤｅｖｉｃｅｓ公司(新加坡ＥＳＣＯ公司)ꎻ恒温培养箱美国Ｓｉ公司()ꎻ德国超奥林巴斯公司公司)ꎻＳｐｅｃｔｒａＭａｘ１９０)ꎻＯｌｙｍｐｕｓ酶标仪(美国Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ)ꎻＬｅｉｃａＣＭ１９５０ＦＳＸ１００冰冻切片机荧光显微镜(德国徕(日本卡公司)ꎻ５０μＬ微量注射器(上海高鸽有限公司)ꎮ

２　２.１　实验方法

协会的标准方法体外作用测定(ＣＬＳＩꎬ２００８　根据美国临床实验室标准化Ｍ２７－Ａ３)ꎬ通过微量稀释法测定伏立康唑与布地奈德联用抗４株白色念珠菌ＭＩ１６４０(ＣＡ４、ＣＡ８、ＣＡ１０、ＣＡ１６)的体外作用ꎮ经ＲＰ￣被分别加到液体培养基稀释后的不同浓度的两个药物９６孔微量稀释平板的不同微孔中ꎬ每个微孔中的菌液终浓度为２×１０３稀释平板的第１２列只加ＲＰＭＩｃｆｕ􀅰ｍＬ－１１６４０液体培养基(９６孔微量ꎬ作为阴性对照)ꎮ９６孔微量稀释平板于３５℃恒温箱中孵育２４ｈ后ꎬ加入ＸＴＴ继续孵育２ｈꎮ经培养后ꎬ使用酶标仪(４９２ｎｍ)读取各孔ＯＤ值ꎮ与无药物干预孔内真菌生长率比较ꎬ以抑制８０％真菌生长的最低药物浓度为ＭＩＣꎬ使用ＦＩＣＩ模型和△Ｅ模型共同评价伏立康唑和布地奈德联用的体外抗白色念珠菌作用ꎮ

ＡＦＩＣＩＭＩＣ药的作用/:ＦＩＣＩ>４ꎬ单用时ＭＩＣ模型的计算和判读标准[５]/单Ｂ药的用时ＭＩＣ(Ａ药协同作用的ＭＩＣ＋:ＦＩＣＩ＝联用时:ＦＩＣＩ≤０.５ꎬ联用时Ｂ药的△Ｅ模型的计算和判读标准无关作用:０.５<ＦＩＣＩ≤４)ꎮ

拮抗[６]Ｅ:△Ｅ＝ＥＡ×ＥＢ－

菌的生长率分别是联用ꎬ其中ꎬ伏立康唑与布地奈德单用时白色念珠ＥＡ和ＥＢꎬ联用时白色念珠菌的生长率为Ｅ联用ꎮ

２.２　件下重复３次ꎮ

期敏(ＣＡ１０)感体内作用测定白的工作菌液真菌细胞配制成终浓度为色念珠菌　(分别用ＣＡ４)ＰＢＳ和耐将适量对数生长１６０μｇ􀅰ｍＬꎬ伏立康唑和布地奈德的终浓度均为５药×１０白色ｃｆｕ􀅰ｍＬ念珠菌８－１－１次试验ꎬ随后向配好的白色念珠菌菌液中加入终浓ꎮ为预防大蜡螟因感染细菌而影响本

度为２μｇ􀅰ｍＬ－１的苯唑西林钠ꎮ随机选取大蜡螟幼虫[(０.２±０.０２)ｇ]若干只ꎬ将其按照随机分组原则分为４组(对照组、伏立康唑、布地奈德、伏立康唑＋布地奈德)ꎬ将其放在无菌培养皿中ꎬ各组１６只ꎮ使用微量进样针通过虫体的腹足注射１０μＬ上述菌液ꎬ３５℃培养２~２.５ｈ使白色念珠菌侵染大蜡螟ＰＢＳꎬ再次通过虫体的另一腹足注射或药液ꎮ接种后ꎬ置于３５℃黑暗环境中培养１０μＬ相应的２.２.１　ꎮ螟幼虫ꎬ大蜡螟生存分析实验步骤同“２.２”　每组选取项下ꎮ培养期间１６只适龄大蜡ꎬ每天对各组存活幼虫进行计数ꎬ共持续观察４ｄꎮ所有实验２.２.２　重复３次真菌载菌量的测定ꎮ用ＳＰＳＳ１９.０软件进行统计分析　每组选取１６只适龄大ꎮ蜡螟幼虫ｈＰＢＳ从各组幼虫中随机取出ꎬ实验步骤同“２.２”中制成匀浆后再进行梯度稀释３只项下(死活均可ꎮ培养期间ꎬ分别取各稀释)ꎬ于ꎬ每１ｍＬ２４浓度下的１０μＬ匀浆于固体ＹＰＤ培养基上ꎬ３５℃培养４８ｈ后对其进行菌落计数ꎮ所有实验在相同实验条件下重复ＰａｄＰｒｉｓｍ６.０软件３ꎮ

次ꎮ进行统计分析时使用Ｇｒａｐｈ￣２.２.３　大蜡螟幼虫大蜡螟病理切片观察ꎬ实验步骤同“２.２”　项下每组选取ꎮ培养１６４８只适龄ｈ后ꎬ

分别从各实验组中随机取出１只幼虫(死活均可)进行ＰＡＳ糖原染色ꎮ所有实验在相同实验条件下重复３次ꎮ３　３.１　实验结果体外作用结果　由表１可以看出ꎬ以ＦＩＣＩ模型

􀅰１４６􀅰药学研究􀅰ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ２０１９Ｖｏｌ.３８ꎬＮｏ.３

评价药物作用时ꎬ两个药物联用对两株耐药白色念珠菌均有协同作用ꎬ而对两株敏感白色念珠菌表现为无关作用ꎻ以△Ｅ模型评价时ꎬ两个药物联用对两株耐药白色念珠菌也有协同作用ꎬ但对两株敏感白

色念珠菌表现为拮抗ꎮ上述两个评价方法共同说明两个药物联用对耐药白色念珠菌有明显的协同对抗作用ꎬ但是对敏感白色念珠菌无协同作用ꎮ

表１　以ＦＩＣＩ模型和△Ｅ模型评价药物体外抗白色念珠菌作用

药物

菌株ＣＡ４ＣＡ１０ＣＡ１６ＣＡ８

ＭＩＣＡ

ＭＩＣ/μｇ􀅰ｍＬ－１０.０３１３０.０３１３０.０６２５０.０１６ＣＡ

１６１６ＭＩＣＢ

ＣＢ８８

ＦＩＣＩ１

ＦＩＣＩ模型

ＩＮ

ΣＳＹＮ

ΣＡＮＴΔＥ模型

ＩＮ

ＶＲＣ＋ＢＵＤ

０.０６２５０.１２５>１６>１６

>２５６>２５６

６４６４

０.６２８０.２５２０.２５４

ＮＩＮＩ

８３.７３％１０.８５％

－３５２.４２％－３７７.０２％－１.０４％－１.１４％

ＡＮＴＡＮＴＳＹＮＳＹＮ

ＳＹＮＳＹＮ

２４０２.７０％２３２３.５７％

３.２　体内作用结果

　　注:ＭＩＣ:最低抑菌浓度ꎻＭＩＣＡ:伏立康唑单用的最低抑菌浓度ꎻＣＡ:药物联用时伏立康唑的最低抑菌浓度ꎻＭＩＣＢ:布地奈德单用的最低抑菌浓度ꎻＣＢ:药物联用时布地奈德的最低抑菌浓度ꎻＦＩＣＩ:分数抑菌浓度指数ꎻΣＳＹＮ:９６孔板中所有正值△Ｅ之和ꎻΣＡＮＴ:９６孔板中所有负值ΔＥ之和ꎮＩＮ:ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎꎬ解释ꎻＮＩ:ｎｏｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎꎬ无关作用ꎻＳＹＮ:ｓｙｎｅｒｇｉｓｍꎬ协同作用ꎻＡＮＴ:ａｎｔａｇｏｎｉｓｍꎬ拮抗作用

３.２.１　药物单用或联用对感染大蜡螟的生存率影响　由图１Ａ可以看出ꎬ对于感染ＣＡ４的大蜡螟ꎬ各组的生存率均无显著性差异(Ｐ>０.０５)ꎬ说明两药联用对感染敏感白色念珠菌的大蜡螟生存率无显著影

响ꎻ图１Ｂ可以看出ꎬ对于感染ＣＡ１０的大蜡螟ꎬ与对照组相比ꎬ药物单用对感染的大蜡螟生存率均无显著的影响(Ｐ>０.０５)ꎬ但两药联用组的生存率显著提高(Ｐ<０.０５)ꎬ说明两药联用可显著提高感染耐药白色念珠菌的大蜡螟生存率ꎮ

Ａ.感染ＣＡ４的大蜡螟ꎻＢ.感染ＣＡ１０的大蜡螟ꎻＶＲＣ.伏立康唑ꎻＢＵＤ.布地奈德

图１　药物单用或联用对感染后的大蜡螟生存率的影响

３.２.２　药物单用或联用对感染大蜡螟的载菌量的影响　由图２Ａ可以看出ꎬ对于感染ＣＡ４的大蜡螟ꎬ各组的载菌量均无显著性差异(Ｐ>０.０５)ꎬ说明两药联用对感染敏感白色念珠菌的大蜡螟体内载菌量无显著影响ꎻ图２Ｂ可以看出ꎬ对于感染ＣＡ１０的大蜡螟ꎬ与对照组相比ꎬ药物单用对感染耐药白色念珠菌的大蜡螟的体内载菌量均无显著的影响(Ｐ>０.０５)ꎬ但两药联用组的载菌量显著降低(Ｐ<０.０５)ꎬ说明两药联用可显著降低感染耐药白色念珠菌的大蜡螟体内载菌量ꎮ

３.２.３　药物单用或联用对感染大蜡螟的组织的影响　组织病理学切片中的黑色团块是白色念珠菌细胞及菌丝形成的团块ꎮ通过观察图３的大蜡螟感染后的病理切片ꎬ我们发现:对于感染ＣＡ４的大蜡螟ꎬ各组的组织病理学切片中黑色团块数量及组织破坏情况均无显著性差异ꎬ说明两药联用对感染敏感白色念珠菌的大蜡螟的组织病理学无显著影响ꎻ图３Ｂ可以看出ꎬ对于感染ＣＡ１０的大蜡螟ꎬ与对照组相比ꎬ药物单用对感染耐药白色念珠菌的大蜡螟的黑色团块数

药学研究􀅰ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ２０１９Ｖｏｌ.３８ꎬＮｏ.３􀅰１４７􀅰

量及组织破坏情况无显著性差异ꎬ但两药联用组的黑色团块数量明显减少、组织破坏程度差ꎬ说明两药联

用可显著降低感染耐药白色念珠菌的大蜡螟的体内真菌数量ꎬ从而降低对大蜡螟的组织损伤ꎮ

Ａ.感染ＣＡ４的大蜡螟ꎻＢ.感染ＣＡ１０的大蜡螟ꎻＶＲＣ.伏立康唑ꎻＢＵＤ.布地奈德

图２　药物单用或联用对感染后的大蜡螟体内载菌量的影响

Ａ.感染ＣＡ４的大蜡螟ꎻＢ.感染ＣＡ１０的大蜡螟ꎮ图中ａ~ｃ:对照组ꎻｄ~ｆ:伏立康唑ꎻｇ~ｉ:布地奈德ꎻｊ~ｌ:伏立康唑＋布地奈德ꎻＶＲＣ.伏立康唑ꎻＢＵＤ.布地奈德ꎮ图中“—”代表２００μｍ

图３　药物单用或联用对感染后的大蜡螟组织的影响

４　讨论

近年来ꎬ白色念珠菌对现有为数不多的抗真菌药物表现出耐药性ꎬ该问题已成为困扰公众健康和临床医护人员的一大难题[１－２]ꎮ目前临床可用的抗真菌药物品种有限ꎬ且大多价格昂贵、毒副作用明显ꎬ使得非抗真菌药物与抗真菌药物的联合应用成为近年来的研究重点[３ꎬ７－１０]ꎮ三唑类抗真菌药物作为经典的抗真菌药物ꎬ临床应用非常广泛ꎬ伏立康唑作为新一代三唑类抗真菌药ꎬ具有生物利用度高、组织分布广、透过深部组织能力强等特点ꎬ备受关注ꎮ在临床抗感染治疗过程中ꎬ一般感染不用糖皮质激素ꎬ因为目前认为糖皮质激素本身无抗真菌作用ꎬ且

具有免疫抑制作用ꎬ担心应用后会引起感染扩散或诱发二重感染ꎮ但在临床上布地奈德与抗真菌药物有联合应用的机会:在重症感染时ꎬ为了减轻感染造成的炎症反应ꎬ通常在抗菌药物“保驾护航”下使用糖皮质激素ꎬ并且临床上也的确获得了满意的效果ꎮ

本研究体外结果显示ꎬ伏立康唑与布地奈德联用时ꎬ对敏感白色念珠菌表现为无关或拮抗作用ꎬ但对耐药白色念珠菌有明显的协同作用ꎬ提示我们找到了一种能够在体外增加耐药白色念珠菌对伏立康唑敏感性的药物－布地奈德ꎮ这对克服现有的白色念珠菌耐药问题有着重大意义ꎮ此外ꎬ为进一步探究伏立康唑与布地奈德联用对白(下转第１５１页)

药学研究􀅰ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ２０１９Ｖｏｌ.３８ꎬＮｏ.３􀅰１５１􀅰

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可以用于甘草素、甘草酸铵的含量测定ꎮ在波长选择方面甘草素的最佳吸收波长为２１３ｎｍꎬ甘草酸铵最大吸收波长为２５０ｎｍꎬ结合ＤＡＤ全波长扫描３Ｄ谱图ꎬ选择２３７ｎｍ作为最佳检测波长ꎮ

由于疏清口服液采用的是醇提与水提结合的两步提取法ꎬ提取浓缩过程中工艺些许变化可能都会对口服液的质量造成一定的影响ꎬ因此每批口服液中甘草素与甘草酸铵的量可能会略有差异ꎮ

综上所述本文建立的采用高效液相色谱法同时测定疏清口服液中甘草素、甘草酸铵的含量测定ꎬ方法具有灵敏度高ꎬ重复性好ꎬ操作简单等优点ꎬ可以为疏清口服液的质量标准的建立提供参考ꎮ

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[２]

(上接第１４７页)

色念珠菌的体内作用效果ꎬ本实验采用一种新型生物侵染模型－大蜡螟ꎬ通过测定感染后大蜡螟的生存率、载菌量以及病理学组织学变化３个指标对药物联用的体内作用进行详细评价ꎮ体内研究结果表明:伏立康唑和布地奈德联用时ꎬ对感染敏感白色念珠菌的大蜡螟无显著体内疗效ꎬ但对感染耐药白色念珠菌的大蜡螟体内疗效显著ꎬ不仅能明显提高其生存率、减慢虫体内真菌的繁殖速度ꎬ还可以明显降低真菌在组织中形成的团块、减少感染对组织的损伤ꎮ由此可见ꎬ该实验从生存分析、载菌量、组织学研究３个方面明确证明了氟伏立康唑和布地奈德联用对感染耐药白色念珠菌的大蜡螟体内作用疗效ꎬ奠定了今后对该药物组合进行哺乳动物药效研究的基础ꎮ

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[８][７]

ｃａｎｓｔｅｓｔｅｄｂｙｃｈｅｑｕｅｒｂｏａｒｄａｎｄｔｉｍｅ－ｋｉｌｌｍｅｔｈｏｄｓ[Ｊ].Ｊｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｃｔｉｏｎａｎｄｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ[Ｊ].ＡｄｖＥｘｐＳＵＮＷꎬＷＡＮＧＤꎬＹＵＣꎬｅｔａｌ.Ｓｔｒｏｎｇｓｙｎｅｒｇｉｓｍｏｆｄｅｘａ￣ｒｅｓｉｓｔａｎｔＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓｍｅｄｉａｔｅｄｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｄｒｕｇｅｆ￣２０１７ꎬ５０(３):３９９－４０５.

ｍｅｔｈａｓｏｎｅｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅａｇａｉｎｓｔｆｌｕｘａｎｄｒｅｄｕｃｉｎｇｖｉｒｕｌｅｎｃｅ[Ｊ].ＩｎｔＪＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓꎬＬＩＸꎬＺＨＡＯＹꎬＨＵＡＮＧＸꎬｅｔａｌ.ＡｍｂｒｏｘｏｌＨｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅＣｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈＦｌｕｃｏｎａｚｏｌｅＲｅｖｅｒｓｅｓｔｈｅＲｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓｔｏＦｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＣｅｌｌＩｎｆｅｃｔＭｉ￣[１０]ＬＵＭꎬＬＩＴꎬＷＡＮＪꎬｅｔａｌ.Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆｐｈｙｔｏｃｏｍ￣

ｃｒｏｂｉｏｌꎬ２０１７(７):１２４.

ＰＲＡＳＡＤＲꎬＳＨＡＨＡＨꎬＲＡＷＡＬＭＫ.Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌｓ:

２４ꎬ１７９ｃａｓｅｓｆｒｏｍａｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｎａｔｉｏｎｗｉｄｅｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ[２]

ＰＦＡＬＬＥＲＭＡꎬＤＩＥＫＥＭＡＤＪ.Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙｏｆｉｎｖａｓｉｖｅｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ:ａｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔｐｕｂｌｉｃｈｅａｌｔｈｐｒｏｂｌｅｍ[Ｊ].Ｃｌｉｎｗｉｔｈｎｏｎ－ａｎｔｉｆｕｎｇａｌａｇｅｎｔｓ:ａｐｒｏｍｉｓｉｎｇａｐｐｒｏａｃｈｔｏｃｏｐｅｗｉｔｈｒｅｓｉｓｔａｎｔＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓａｎｄｉｎｓｉｇｈｔｉｎｔｏＬＩＵＳꎬＨＯＵＹꎬＣＨＥＮＸꎬｅｔａｌ.Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ

[９]

[３]

ｐｏｕｎｄｓｏｎＣａｎｄｉｄａｓｐｅｃｉｅｓａｌｏｎｅａｎｄｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈ

１２５－１３６.

ｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ[Ｊ].ＩｎｔＪＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓꎬ２０１７ꎬ４９(２):