维普资讯 http://www.cqvip.com ・交流园地・ ２００７年９月第４卷第２５期 保证免疫组化染色质量的几个要点 何丽馥．万义增．杨京京 （锦州医学院附属三院病理科，辽宁锦州 １２１００１） 【摘要】免疫组化染色是临床病理学的重要诊断手段之一，该染色步骤繁琐且每一步都可能影响染色的最终结果，因 此保证染色质量是贯穿于免疫组化实验全过程的核心。欲得到一张高质量的免疫组化染色片，必须做好组织固定和 制作蜡片的基础工作，准确掌握抗原修复的时间和温度，严格按照染色步骤进行操作。 Ｉ关键词】免疫组化；染色；组织固定；抗原修复 【中图分类号】Ｒ４４６．８ 【文献标识码】Ｃ 免疫组化染色目前已成为临床病理学的重要诊断手段 之一，其作用毋庸置疑．同时还可用于鉴别诊断、评估预后、 指导化疗等方面。一张良好的免疫组化染色片是正确判断染 色结果的基础和前提．但免疫组化染色步骤繁琐且每一步都 可能影响染色的最终结果．故保证染色质量是贯穿于免疫组 化实验过程的核心。要得到一张高质量的免疫组化染色片， 不是一件容易的事。如同苏木精一伊红染色一样，需要病理 技术员和病理医生的互相配合、协调、共同努力。尽管如此， 工作中我们还是常常遇到各种问题。笔者通过临床工作和实 践，总结如下，仅供同行们参考。 １组织固定 固定的目的之一是最大限度地保存组织细胞内的抗原 性。固定液选用１０％缓冲福尔马林液。组织离体后，应尽快 （最好在３０ ｍｉｎ内）固定１２—２４ ｈ。这样做是因为临床实际工 作中，手术量往往较大，而且经常是标本送来后的第２天取 材。取材后，常常即刻进人全自动脱水机程序化处理，个别标 本不能得到及时、充分的固定。因此，我们采取的方法是手术 标本送来后，即刻将大标本剖开，及时固定，保持固定液在组 织的１０倍以上，以免蛋白质变性，抗原丢失。特别是夏季更 应慎重。 免疫组化染色过程长．步骤多，且抗原修复时需要加热 至９５℃以上，虽然经过及时固定组织块和ＡＰＥＳ胶处理玻 片．组织片仍偶有脱落、破碎、不完整或边缘卷起的现象，影 响镜下观察。我们发现，边缘卷起的切片一般都有假阳性染 色。如何解决这一问题呢？我们的做法是首先做好组织的前 期处理，从第一步组织取材开始到包埋结束，每一步都要严 格规范化，取材厚度不超过３ ｍｍ。控制好固定、脱水、透明、 浸蜡每个步骤的时间、温度．真正做到充分、合理。经过这样 处理后的优质蜡块，再加上锋利无痕的刀具，娴熟的切片手 法，切出一张薄而完整、均匀的切片应该不是一件难事。其 次，烤片是一个不容忽视的环节，它较苏木精一伊红染色时 间长，一般热修复高压法烤片要３ ｈ以上，温度要求高于包 埋蜡２℃。这样就尽量克服了上述的不足，大大减少了医生阅 片时的困难。 １ ４４巾目医药导鼻ＣＨＩＮＡ ＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ 【文章编号】１６７３—７２１０（２００７）０９（ａ）一１４４—０１ ２抗原修复 由于甲醛固定时，组织中许多分子内或分子间形成了醛 键。使得不少抗原决定簇被封闭，相当部分抗原不能与抗体 很好地进行反应。因此，抗原修复是做好免疫组化染色的关 键环节。目前，用作抗原修复的方法有两种：热修复和酶消 化。热修复包括高压、微波、水浴。我们认为高压法较易掌握， 临床应用广泛。酶消化有胃酶和胰酶两种消化。热修复用于 大多数抗原，尤其是核抗原，如ＰＲ、ＥＲ、Ｋｉ６７、ｐ５３等。抗原修 复液一般用０．１ ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸或柠檬酸盐液，ｐＨ为６．０。胰酶 消化适用于细胞内抗原：胃酶消化适用于细胞间抗原。还有 些抗原需双暴露法。即热修复＋酶消化。总之，应严格按照抗 体说明书要求进行修复。 ３严格按照染色步骤要求操作 整个免疫组化过程步骤多，过程长。每一步都应严格按 照要求进行操作，如脱蜡时间一定要充分；室温过低时，应先 将二甲苯放人温箱加热，脱苯用的酒精也应设法加热以充分 脱苯。其他染色步骤所用的试剂，也是如此。室温过低时应尽 量设法提高试剂的温度（利用水浴箱、热台等），否则易导致 染色失败。每一步ＰＢＳ（ｐＨ为７．２～７．４）冲洗时间、次数一定不 能省略，因ＰＢＳ液内含有盐，可以减少背景染色。 ４显色反应 作为临检工作的免疫组化染色，由于每次试验所作标本、 组织来源不同，抗原含量不等。因此，切片显色要求镜下观 察，控制显色时间。最好先看苏木精一伊红切片，了解基本病 变，熟悉抗体定位特点，排除假阳性着色干扰，找准切片中的 病变位置。滴加显色剂时，一次不要加得过多，以免来不及观 察，而致显色过度。有些抗体如ＣＤ系列显色反应较快，应先 镜下观察，ＥＲ、ＰＲ等抗体显色较慢，可以稍往后放。显色程 度的控制，可观察红细胞稍着淡黄色即终止显色，时间不宜 过长，以免导致泛染。 ［参考文献】 【１】周小鸽．免疫组化染色过程中存在的问题及对策『ＪＩ．诊断病理学杂志， ２００４，１１（４）：４—６，８６． （收稿日期：２００７—０７—２６）