・ｌ２２２・ ＷＯＲＬＤ ＣＨＩＮＥＳＥ ＭＥＤＩＣＩＮＥ Ｏｃｔｏｂｅｒ．２０１３，Ｖｏ１．８，Ｎｏ．１０ 黄芪与不同剂量柴胡配伍的退热作用及机制的探讨 赵荣华 高秀兰 谢鸣 张敬升 （１北京中医药大学国家重点方剂学学科，北京，１０００２９；２山东中医药高等专科学校，莱阳，２６５２００） 摘要 目的：探讨黄芪与不同剂量柴胡配伍对脾虚发热大鼠模型的退热作用及机制。方法：雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为正常对照 组、脾虚发热组、芪柴大、中、小剂量组、柴胡组共６组。采用饮食失节＋游泳疲劳＋ＬＰＳ制备大鼠脾虚发热模型。实验第１７ｄ 开始，各给药组大鼠分别按剂量４．５６ ｋｇ、２．９５ ｇ／ｋｇ、２．４１ ｇ／ｋｇ、２．４１ ｇ／ｋｇ给予灌胃，正常组和脾虚发热组给予同体积蒸馏水， 每日１次，连续６ ｄ。第２２天模型组和各给药组ｉｐ ＬＰＳ（８０ ｋｇ），正常对照组ｉｐ等量生理盐水。观测各组大鼠ｉｐ后不同时间 点的体温，测定血中细胞因子和下丘脑体温调节递质的含量。结果：与正常组相比，脾虚发热组大鼠在ｉｐ ＬＰＳ后各点体温均见 不同程度升高，６０ ｒａｉｎ和２２０ ｍｉｎ时升高明显（Ｐ＜０．０５）；血ＩＬ一２显著升高（Ｐ＜０．０５）；下丘脑ｃＡＭＰ和ＰＧＥ２显著升高（Ｐ＜ ０．０５），ＡＶＰ呈下降趋势。与脾虚发热模型组相比，各给药组大鼠体温均出现不同程度下降（Ｐ＜０．０５），下丘脑ＰＧＥ 或ＡＶＰ呈 现降低或升高趋势，其中柴胡组和芪柴小剂量组的体温下降明显，下丘脑ＩＬ一１Ｂ显著降低（Ｐ＜０．０５），芪柴大剂量组血ＩＬ一１Ｂ 显著升高（Ｐ＜０．０５）。与芪柴大剂量组比，芪柴中、小剂量组及柴胡组血ＩＬ一１Ｂ均显著降低（Ｐ＜０．０５），芪柴中、小剂量组血ＩＬ 一２显著升高（Ｐ＜０．０５）。结论：黄芪配伍柴胡不同剂量及单用大剂柴胡对脾虚发热模型均有不同程度的退热作用，其退热机 制可能与降低中枢发热递质ＰＧＥ 和升高ＡＶＰ有关，黄芪与小剂柴胡配伍和单纯大剂柴胡的退热作用可能还涉及到中枢ＩＬ一 １８的降低。 关键词黄芪；柴胡；配伍；脾虚发热；退热 Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ａｎｔｉｐｙｒｅｔｉｃ Ｅｆｆｅｃｔｓ ａｎｄ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ Ｃｏｍｐｌｙｉｎｇ ｗｉｔｈ Ｄｉｆｅｒｅｎｔ Ｄｏｓａｇｅｓ ｏｆ Ｒａｄｉｘ Ｂｕｐｌｅｕｒｉ Ｚｈａｏ Ｒｏｎｇｈｕａ ，Ｇａｏ Ｘｉｕｌａｎ ，Ｘｉｅ Ｍｉｎｇ ，Ｚｈａｎｇ Ｊｉｎｇｓｈｅｎｇ （１ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｋｅｙ Ｄｉｓｃｉｐｌｉｎｅ，Ｂｅ ｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅ ｎｇ １０００２９，Ｃｈｉｎａ； ２ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｆ ｏＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｅ，Ｙａｎｔｎａｉ ２４６１００，Ｃｈｉａ）ｎ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ａｎｔｉｐｙｒｅｔｉｃ ａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｃｏｍｐｌｙｉｎｇ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓａｇｅｓ ｏｆ Ｒａｄｉｘ Ｂｕｐｌｅｕｒｉ ｏｎ ｔｈｅ ｒａｔ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｓｐｌｅｅｎ—ｑｉ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗｉｔｈ ｆｅｖｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｍａｌｅ ｗｉｓｔａｒ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ａｓｓｉｇｎｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｓｐｌｅｅｎ—ｑｉ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗｉｔｈ ｆｅｖｅｒ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｗｉｔｈ ｌａｒｇｅ ｄｏｓａｇｅ ｒａｄｉｘ ｂｕｐｌｅｕｒｉ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｗｉｔｈ ｍｅｄｉｕｍ ｄｏｓａｇｅ ｒａｄｉｘ ｂｕ— ｐｌｅｕｒｉ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｗｉｔｈ ｓｍａｌｌ ｄｏｓａｇｅ ｒａｄｉｘ ｂｕｐｌｅｕｒｉ ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｄｉｘ ｂｕｐｌｅｕｒｉ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｒａｔｓ ｏｆ ｓｐｌｅｅｎ・ｑｉ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗｅｒｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｅｘｃｅｓｓ ｆａｔｉｇｕｅ ａｎｄ ｏｕｔ ｏｆ ｃｏｎｓｔａｎｔ ｄｉｅｔ ｆｏｒ ２１ ｄａｙｓ．Ｔｈｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｇｒｏｕｐ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｆｅｄ ｗｉｔｈ ４．５６ｇ／ｋｇ（１ａｒｇｅ），２． ９５ ｋｇ（ｍｅｄｉｕｍ）２．４１ｇ／ｋｇ（ｓｍａｌ１）ａｎｄ ２．４１ｇ／ｋｇ（ｒａｄｉｘ ｂｕｐｌｅｕｒｉ ｏｎｌｙ）ｏｎｃｅ ａ ｄａｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｇｉｖｅｎ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓａｌｉｎｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｅｖｅｎｔｅｅｎｔｈ ｄａｙ．Ａｔ ８：００ ａｍ ｏｎ ｔｈｅ ２２ｔｈ ｄａｙ，ｔｈｅ ｒａｔｓ ｏｆ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏ— ｎｅａｌｙ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｌｉｐｏｐｏｌｙ ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＬＰＳ，８ ０ ｇ／ｋｇ）ｔｏ ｉｎｄｕｃｅ ｆｅｖｅｒ．Ｔｈｅ ｒａｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｇｉｖｅｎ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓａｌｉｎｅ． Ｔｈｅ ｒｅｃｔａｌ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ ａｆｔｅｒ ｉｐ ＬＰＳ．Ａｎｄ ｔｈｅｎ ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔｓ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｂｌｏｏｄ ａｎｄ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ ｗｈｉｃｈ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｉｎ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ｒａｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｐｌｅｅｎ—ｑｉ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗｉｔｈ ｆｅｖｅｒ ｇｒｏｕｐ ｒａｉｓｅｄ ｔｏ ｓｏｍｅ ｅｘｔｅｎｔ ａｔ ｅｖｅｒｙ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ａｆｔｅｒ ｉｐ ＬＰＳ．ｅｓｐｅｃｉｌｌａｙ ａｔ ６０ｍｉｎ ａｎｄ ２２０ｍｉｎ（Ｐ＜ ０．０５）．ＩＬ一２ ｉｎ ｂｌｏｏｄ、ＣＡＭＰ ａｎｄ ＰＧ ｉｎ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０５）．ＡＶＰ ｉｎ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ ｈａｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ．Ｃｏｒｎ— ｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｐｌｅｅｎ—ｑｉ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗｉｔｈ ｆｅｖｅｒ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ｒａｔｓ ｉｎ ｅｖｅｒｙ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｇｒｏｕｐ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｔｏ ｓｏｍｅ ｅｘ— ｔｅｎｔ（Ｐ＜０．０５）．ＣＡＭＰ ａｎｄ ＰＧＥ２ ｉｎ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｏｒ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｄｅｃｌｉｎｅｄ ａｎｄ ＩＬ一１ ３１ｉｎ ｈｙｐｏｔｈａｌ— ａｍｕｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０５）ｉｎ ｔｈｅ ｒａｄｉｘ ｂｕｐｌｅｕｒｉ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｔｈｅ ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｗｉｔｈ ｓｍａｌｌ ｄｏｓａｇｅ ｒａｄｉｘ ｂｕｐｌｅｕｒｉ ｇｒｏｕｐ．Ｂｌｏｏｄ ｏｆ ＩＬ一１Ｂ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０５）ｉｎｔｈｅ ａｓｔｒａｇａｌｕｓｗｉｔｈｌａｒｇｅ ｄｏｓａｇｅ ｒａｄｉｘ ｂｕｐｌｅｕｒｉｇｒｏｕｐ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅ ａｓｔｒａｇａｌｕｓｗｉｔｈｌａｒｇｅ ｄｏｓａｇｅ ｒａｄｉｘ ｂｕｐｌｅｕｒｉ ｇｒｏｕｐ，ｂｌｏｏｄ ＩＬ－１ Ｂ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０５）ｉｎ ｔｈｅ ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｗｉｔｈ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｗｉｔｈ ｓｍａｌｌ ｄｏｓａｇｅ ｒａｄｉｘ ｂｕｐｌｅｕｒｉ ｇｒｏｕｐｓ，ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｔｈｅ ｒａｄｉｘ ｂｕｐｌｅｕｒｉ ｇｒｏｕｐ．Ｂｌｏｏｄ ＩＬ一２ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０５）ｉｎ ｔｈｅ ａｓｔｒａｇｌｕｓａ ｗｉｔｈ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｗｉｔｈ ｓｍａｌｌ ｄｏｓａｇｅ ｒａｄｉｘ ｂｕｐｌｅｕｒｉ ｇｒｏｕｐｓ。Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｃｏｍｐｌｙｉｎｇ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ｒａｄｉｘ ｂｕｐｌｅｕｒｉ ａｎｄ ｏｎｌｙ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｌａｒｇｅ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ｒａｄｉｘ ｂｕｐｌｅｕｒｉ ｈａｄ ａｎｔｉｐｙｒｅｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｔｏ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｒａｔ ｏｆ ｓｐｌｅｅｎ—ｑｉ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗｉｔｈ ｆｅｖｅｒ．Ｉｔｓ ａｎｔｉｐｙｒｅｔｉｃ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｍａｙ ｂｅ ｃｏｎｎｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｃｅｎｔｒａｌ ｐｙｒｅｘｉａ ａｍｂｏｃｅｐｔｏｒ ＰＧ ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ＡＶＰ．Ａｎｄ ａｓｔｒａｇａｌｎｓ ｃｏｍｐｌｙｉｎｇ ｗｉｔｈ ｓｍａｌｌ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ｒａｄｉｘ ｂｕｐｌｅｕｒｉ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｎｌｙ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｌａｒｇｅ ｄｏｓａｇｅ ｒａｄｉｘ ｂｕｐｌｅｕｒｉ ｍａｙ ｂｅ ａｌｓｏ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｄｅｃｌｉｎｉｎｇ ｏｆ ｃｅｎｔｒａｌ ＩＬ一１ Ｂ． 基金项目：山东省高等学校科技计划项目（编号：ＪＩＯＬＦ８０） 通信作者：谢鸣（１９５７．６Ｌ），男，博士生导师，教授，研究方向：“方证相关”的研究，Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｉｅｍｉｎｇ６０３＠２６３．ｎｅｔ 世界中医药２０１３年１０月第８卷第１０期 ・１２２３・ Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓ；Ｒａｄｉｘ ｂｕｐｌｅｕｆｉ；Ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ；Ｓｐｌｅｅｎ—ｑｉ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗｉｔｈ ｆｅｖｅｒ；Ａｎｔｉｐｙｒｅｔｉｃ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—７２０２．２０１３．１０．０３２ 补中益气汤是中医治疗脾虚发热的代表方剂，方 称芪柴大剂组）、黄芪柴胡中剂量组（芪柴中剂组）、黄 中较大剂量的黄芪与小剂量柴胡配伍是益气退热的主 芪柴胡小剂量组（芪柴小剂组）、单纯柴胡大剂量组 要药对。柴胡微寒、苦辛，具有解表退热、疏肝解郁和 （柴胡组）共６组，每组１０只。除正常对照组外其余各 升阳等功效。根据方药病证相关的原理，方药的功效 组大鼠采用饮食失节＋游泳疲劳法制备脾虚模型 。 不仅与其所治证候有关，也与药物的使用剂量有关 。 模型复制第１７ ｄ开始，芪柴大剂量组、芪柴中剂量组、 之前我们的研究发现大剂量单味黄芪对脾虚发热证模 芪柴小剂量组、柴胡组四组大鼠分别按剂量４．５６ ｇ／ 型具有一定的退热作用 Ｊ，本文则进一步考察大剂量黄 芪与不同剂量的柴胡配伍对该模型的退热效用及机制。 １ 材料 １．１实验动物雄性ｗｉｓｔａｒ大鼠，２００～２２０ ｇ，６０只。 购于北京市维通利华实验动物技术有限公司，动物许 可证号：ＳＣＸＫ（京）一２００６—０００９。 １．２药材黄芪、柴胡由北京同仁堂药业股份有限公 司提供，并经北京中医药大学中药学院中药鉴定教研 室张媛教授鉴定为豆科植物内蒙黄芪的干燥根和伞形 科植物柴胡的干燥根。实验用药液制备：黄芪２４ ｇ，分 别与柴胡２７ ｇ、９ ｇ、３ ｇ配伍，组成三个不同配方（简称 为芪柴大剂、中剂、小剂）；柴胡２７ ｇ设为单味柴胡方。 各方均按常规汤药制备方法，即取药材加５倍体积冷 水浸泡３０ ｍｉｎ，加热煮沸后煎煮３０ ｍｉｎ，倾出药液；残 渣加３倍体积水煮沸后煎煮３０ ｍｉｎ；合并先后两次的 煎煮液，浓缩成１ ｇ（生药）／ｍＬ的浓度，备用。 １．３试剂ＬＰＳ注射液的制备：脂多糖（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ０５５Ｂ５，Ｌ２８８０，ＬＰＳ），Ｓｉｇｍａ公司生产。 无菌条件下，用生理盐水将ＬＰＳ配成浓度为２０ ｐ￣ｇ／ｍＬ 的ＬＰＳ注射液，备用。ＩＬ一１一ＲＩＡ试剂盒（批号： ２０１１１２１６）、ＩＬ一２一ＲＩＡ试剂盒（批号：２０１１１２２３）， ＰＧＥ２一ＲＩＡ试剂盒（批号：２０１１１２１９）、ｃＡＭＰ—ＲＩＡ试 剂盒（批号：２０１１１２２１）、ＡＶＰ—ＲＩＡ试剂盒（批号： ２０１ １ １２２５）均由北京华英生物技术研究所提供。 １．４仪器电脑数字温度计ＭＣ一３Ｂ型：ＯＭＲＯＭ欧 姆龙（大连）有限公司生产。精密度：０．１。Ｃ。塑料钢 化筒（执行标准：Ｑ／ＷＨＣ０２—２００２）。 ２方法 ２．１脾虚发热证动物模型的复制 采用饮食失节＋ 游泳疲劳＋腹腔注射ＬＰＳ法 。 ２．２分组与处理实验动物于２５ｃＣ室温下适应性饲 养４ ｄ，第４～５ ｄ连续两次肛温波动超过０．５℃或单次 肛温超过３９℃的大鼠剔除不用，取两次肛温的平均值 作为基础体温。符合条件的大鼠随机分为正常对照 组、脾虚发热模型组（模型组）、黄芪柴胡大剂量组（简 ｋｇ、２．９５ ｋｇ、２．４１ ｋｇ、２．４１ ｋｇ（相当于生药材含 量）给予相应的药物灌胃，正常对照组和脾虚发热模型 组给予同体积蒸馏水，１次／ｄ，连续６ ｄ。于造模第２２ 天的上午８：Ｏ０，脾虚发热模型组和各给药组大鼠腹腔 注射ＬＰＳ（８０ ｋｇ），正常对照组注射等量生理盐水。 腹腔注射后，各组灌胃给药１次。分别测定各组大鼠 ＬＰＳ注射后不同时间点的肛温；最后～次肛温测定后 即刻断头取血，２５００ ｒ／ｍｉｎ离心１５ ｍｉｎ，取血清，一 ２０℃保存；低温条件下取下丘脑。 ２．３观测指标 ２．３．１体温各组大鼠ＬＰＳ注射后３０ ｍｉｎ、６０ ｍｉｎ、 １２０ ｍｉｎ、１８０ ｍｉｎ、２２０ ｍｉｎ的肛温，测算各组△Ｔ（实测 体温与基础体温之间的差）并绘制平均体温曲线。 ２．３．２细胞因子血清ＩＬ一１ Ｂ和ＩＬ一２：放射免疫法 测定，按试剂盒说明操作。 ２．３．３下丘脑热调节递质ＰＧＥ，、ｃＡＭＰ、ＡＶＰ：取下 丘脑组织０．３～０．５ ｇ，滤纸吸干组织液和血液后，加生 理盐水１ ｍＬ（含０．０５ ｍｏｌ／Ｌ醋酸２０ ），制备匀浆， ３０００ ｒ／ｍｉｎ １０ ｍｉｎ，取上清液；加入０．０５ ｍｏｌ的ＮａＯＨ ２５ ＩＬＬ（ｐＨ ７．４）。取上清液１０ 加入定量的蛋白试 剂中，采用分光光度法测定蛋白含量；其余置４￣Ｃ保 存，测定前用１ ｍＬ醋酸缓冲液溶解，采用放免法检 测 。 ２．４数据的统计和处理所得数据均以（ ±ｓ）表示， 采用单因素方差分析进行检验后，多组间比较采用 Ｓｔｕｄｅｎｔ Ｎｅｗｍａｎ Ｋｅｕｌｓ Ｔｅｓｔ检验。全部数据采用ＳＰＳＳ １７．０ ｆｏｒ ｗｉｎｄｏｗｓ软件统计处理。 ３ 结果 ３．１ 黄芪与不同剂量柴胡配伍对脾虚发热大鼠体温 的影响结果见表１。如表１所示，与正常对照组相 比，脾虚发热模型组大鼠体温升高，在６０ ｍｉｎ、２２０ ｍｉｎ 时的差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。与脾虚发热模型 组相比，各给药组大鼠体温均呈不同程度降低，其中芪 柴大剂组体温在６０ ｍｉｎ、１２０ ｍｉｎ、２２０ ｍｉｎ时下降明 显（Ｐ＜０．０５），芪柴中剂组、芪柴小剂组及柴胡组在 ・１２２４－ ＷＯＲＬＤ ＣＨＩＮＥＳＥ ＭＥＤＩＣＩＮＥ Ｏｃｔｏｂｅｒ．２０１３，Ｖｏ１．８，Ｎｏ．１０ 注：与正常对照组比， Ｐ＜０．０５；与模型组相比， Ｐ＜０．０５；与柴胡组比， Ｐ＜０．０５。 ６０ ｍｉｎ、１８０ ｍｉｎ、２２０ ｍｉｎ时的体温均下降明显（Ｐ＜ ０．０５）。 ３．２黄芪与不同剂量柴胡配伍对脾虚发热大鼠血中 细胞因子的影响结果见表２。如表２所示，与正常 组相比，脾虚发热模型组大鼠血ＩＬ一２明显升高（Ｐ＜ ０．０５），ＩＬ一１Ｂ见降低趋势（Ｐ＞０．０５）。与脾虚发热 模型组相比，芪柴大剂组大鼠ＩＬ一１ Ｂ升高（Ｐ＜ ０．０５）、ＩＬ一２有降低趋势（Ｐ＞０．０５），芪柴中剂和小剂 量组ＩＬ一２呈升高趋势（Ｐ＞０．０５），芪柴中剂、小剂及 柴胡组ＩＬ一１Ｂ均无明显变化。与芪柴大剂组比，芪柴 中剂和小剂组的ＩＬ一１Ｂ均见降低、ＩＬ一２均见升高（Ｐ ＜０．０５）。与柴胡组相比，芪柴大剂组ＩＬ一１Ｂ明显升 高（Ｐ＜０．０５）。 表２黄芪与不同剂量柴胡配伍对脾虚发热大鼠免疫因子 的影响（ ±ｓ，ｍＬ ） 注：与正常对照组比， Ｐ＜０．０５；与模型组相比， Ｐ＜０．０５；与苠柴 大剂量组比， Ｐ＜Ｏ．０５；与柴胡组比，０Ｐ＜Ｏ．０５。 表３黄芪与不同剂量柴胡配伍对脾虚发热大鼠 下丘脑相关递质的影响（ ±ｓ，ｍｇ ） 例数 而 器娅 注：与对照组比， Ｐ＜０．０５；与模型组相比，ａｐ＜０．０５；与柴胡组比， Ｐ＜ ０．０５。 ３．３ 黄芪与不同剂量柴胡配伍对脾虚发热大鼠下丘 脑发热调质的影响结果见表３。如表３所示，与正 常组相比，脾虚发热模型组大鼠下丘脑ｃＡＭＰ和ＰＧＥ： 含量均明显升高（Ｐ＜０．０５），ＡＶＰ呈下降趋势。与脾 虚发热模型组相比，芪柴各剂量组和柴胡组大鼠下丘 脑ＰＧＥ ／ＡＶＰ分别呈降低／升高趋势（Ｐ＞０．０５），芪柴 小剂量及柴胡组下丘脑ＩＬ—ｌＢ含量降低明显（Ｐ＜ ０．０５）。与柴胡组相比，芪柴中剂量组大鼠ＩＬ一１Ｂ含 量显著升高（Ｐ＜０．０５）。其余指标各组间差异均无统 计学意义。 ４讨论 体温调节的高级中枢主要位于视前区下丘脑前部 （ＰＯＡＨ），由正负两种递质相互作用所调节，其中正调 节递质有环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）、前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ ）、 氧化亚氮（ＮＯ）等，负调节递质有精氨酸加压素 （ＡＶＰ）等。当外周致热信号传人中枢后，启动体温正 负调节机制，正负调节相互作用的结果决定调定点上 移水平和发热的幅度 一７ ３。ＬＰＳ是一种外源性致热 原，ＬＰＳ诱导的发热是通过刺激内源性致热源，如ＩＬ一 １、ＩＬ一６等及介导细胞因子作用于中枢下丘脑视前区 所致 －９ ３，目前普遍认为，ＰＧＥ，是ＬＰＳ诱导发热的主 要中枢递质 。本实验中观察到，有ＬＰＳ诱导的脾虚 发热模型大鼠体温升高的同时伴有下丘脑ｃＡＭＰ和 ＰＧＥ 含量升高，ＡＶＰ呈下降趋势，血中相关细胞因子 未见明显变化，与ＬＰＳ诱导正常大鼠发热见到的血ＩＬ 一１ ｐ升高¨ ，下丘脑ＰＧＥ ／ＡＶＰ呈升高／下降及 ｃＡＭＰ呈降低趋势 有所不同。结果表明该模型的发 热机制主要涉及到中枢相关调质的变化，提示ＬＰＳ致 热机制可能因机体不同状态而有所不同。 ＩＬ是体内活跃的免疫促进因子，其水平高低不仅 是机体细胞免疫的重要标志，也是ＬＰＳ诱导发热的重 要的内源性递质之～ ｌ 。本次由脾虚大鼠注射ＬＰＳ 后，外周血ＩＬ～２升高与单纯脾虚证模型大鼠的血ＩＬ 一２降低” 不同。提示单纯脾虚模型和脾虚发热模 型各自具有不同的免疫状态。联系到中医的理论和经 验，脾虚发热的关键病机是脾虚或气虚，但临床上脾虚 患者并不必然伴有发热，提示脾虚发热与单纯脾虚有 （下接第１２２７页） 世界中医药２０１３年１０月第８卷第ｌ０期 中的葸醌衍生物的抗菌作用与其本身的化学结构有着 有明显的抑制作用。而郑超等＿８ 人研究指出，单药组 方大黄对大肠杆菌的抑制作用并不明显，而组方用药 体外抑菌作用，值得进一步深入研究，应用至临床。 ［１］谭复成，朱烈彬．大黄的不同炮制与药效关系探讨［Ｊ］．中华中西医 学杂志，２００６，４（３）：６Ｏ一６３． 密切的联系。姬志伟 等研究发现，大黄对大肠杆菌 参考文献 中配伍大黄，能起到较好的大肠杆菌抑制作用。笔者 分析原因可能是因为所使用的药物的来源与质量、制 备工艺、药物浓度、大肠杆菌的来源及实验条件等因素 而导致的结果上的差异。 本文进行了大承气汤对大肠杆菌的体外抑制实验 ［２］国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）［ｓ］．２０１０年版．北 京：化学工业出版社，２０１０：１７—１８． ［３］王晓晖，刘亭岐，陈波，等．１４种中药及其组方对Ｉ临床常见致病菌的 抑菌作用［Ｊ］．畜牧与兽医，２００９，４１（８）：７４—７６． ［４］刘荣欣，鲁改儒，郭吉勇，等．中药及其组方对大肠杆菌的体外抑菌 试验［Ｊ］．安徽农业科学，２０１１，３９（４）：２２６５—２２６７． ［５］Ｓｏｋｋａｒ ＳＭ，Ｄａｒｗｉｅｓｈ Ｇ，Ｍａｄｂｏｏｌｙ Ａ．Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ｉｎ ｒａｍｓ［Ｊ］．Ｊ Ｖｅｔ Ｍｅｄ，２００８，５０（５）：２２６— ２３０． 研究，并以抗生素类西药作为对照组，观察了两组药物 对大肠杆菌的抑制效果，实验结果中，先锋霉素６号对 大肠杆菌的抑菌作用非常强，抑菌圈直径高达１９．１ ［６］常明向，章晶，陈科力．黄连、赤芍及大黄对大肠杆菌内毒素释放的 影响［Ｊ］．中成药，２００７，２９（５）：７５２—７５３． ［７］姬志伟，罗连城，解基良，等．大承气冲剂和大黄的体外抑菌作用 ［Ｊ］．中国中西医结合外科，２００３，９（６）：４５１—４５３． ［８］陈超，郑成中．致病性大肠杆菌胃肠感染小鼠模型血浆Ｔｈｌ、Ｔｈ２、 Ｔｈｌ７淋巴细胞因子变化及意义［Ｊ］．中国医药导报，２０１３，１０（１９）：３７ —ｍｍ，表现为高度敏感。大承气汤对大肠杆菌的抑制作 用也较为明显，抑菌圈直径稍小于先锋霉素６号，为中 度敏感。该实验结果说明，大承气汤具有较好的大肠 杆菌抑制作用，但与抗生素类药物相比，中药大承气汤 的抑菌作用相对要缓慢一些，不及先锋霉素６号强效、 速效。 ３９． 综上所述，大承气汤对体外大肠杆菌具有良好的 （上接第１２２４页） 参考文献 报，２００４，２４（ｓ１）：３７—３８． （２０１３—０３—３１收稿） 谢鸣．中药多向功效在方剂中选择性作用［Ｊ］．湖南中医学院学 所不同，或可能是脾虚证中的一个特殊类型。目前中医 ［１］张林，有关脾虚（气虚）发热机制有各种不同的认识 ，提示 ［２］高秀兰，赵荣华，谢鸣，等．不同剂量黄芪对脾虚发热大鼠模型作用的 同一脾虚发热证在内涵上存在一定的异质性。而本次 观察［Ｊ］．中药药理与临床，２０１３，２９（２）：ｌＪｌ一１１３． 谢鸣，高秀兰，等．脾虚发热证大鼠模型的研究［Ｊ］．中国中医 研究中的脾虚发热模型是基于“虚邪致热”机制及将 ［３］刘进娜， ＬＰＳ作为一种六淫因素的考虑而设计的 ３］，该模型大鼠 基础医学杂志，２０１２，１８（２）：１５０—１５３．所伴有中枢一免疫系统变化可能反映了某种脾虚发热 类型的状态。 ［４］何维．医学免疫学［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２００５，１：４１６． ［５］王琳，焦红军．发热机制的研究进展［Ｊ］．中医研究，２０００，１３（２）：５７— ５９． 实验观察到，各给药组大鼠体温均呈不同程度降 ［６］曹志友．下丘脑ＴＲＰＶ１在ＬＰＳ致大鼠发热过程中对体温及脑内ＡＶＰ 低，下丘脑ＰＧＥ ／ＡＶＰ分别呈降低／升高趋势，提示其降 含量、［ｃａ ］ｉ的影响［Ｄ］．沈阳：中国医科大学，２０１０． ［７］黄启福．病理学［Ｍ］．北京：科学出版社，２００７：１２７—１３１． 温与调节中枢体温正负调质的含量有关。实验中的大 ［８］Ｌｉｓａ Ｒ Ｌ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｖｅｒ．ｓｔｕｄｉｅｓ ｕｓｉｎｇ ｇｅｎｅ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｍｉｃｅ 剂量柴胡组和芪柴小剂量组的体温下降幅度较为明显， ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００２，９２（６）：２６４８—２６５５． 同时伴有下丘脑ＩＬ一１ Ｂ含量明显降低，表明此二组的 ［９］黄涛，孟立，沈字玲等．长时间运动对正常大鼠体温和ＬＰＳ发热反应 的影响与ＩＬ一６的关系［Ｊ］．成都医学院学报，２００８，３（１）：１６—１９． 降温作用还涉及到对下丘脑ＩＬ一１ Ｂ的下调，提示其退 热作用涉及到中枢的多个环节。 退热作用 ｊ，本次观察到单昧大剂柴胡对该模型也有 较好的退热效应，而黄芪与小剂量柴胡配伍较之于与 ［１Ｏ］唐晓峰，薛漫清，王晖．大鼠发热模型及发热机制的研究进展［Ｊ］．广 东药学院学报，２００９，２５（３）：３２７—３３０． ｉｏｓｃｉ，２００４，９：１４３３—１４４９． 之前的研究表明大剂量黄芪对该模型具有明显的 ［１１］ＣＯＮＴＩＢ，ＴＡＢＡＲＥＡＮ Ｉ，ＡＮＤＲＥＩＣ，ｅｔａ１．Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｆｅｖｅｒ［Ｊ］．Ｆｒｏｎｔ Ｂ ［１２］田文静．柴胡透邪退热功用与其用量、配伍及机体状态关系研究 ［Ｄ］．北京中医药大学，２０１０． 大、中剂量配伍的作用更好，表明方药配伍后的效用不 ［１３］ＳＴＥＩＮＥＲ Ａ Ａ，ＩＶＡＮＯＶ Ａ Ｉ，ＳＥＲＲＡＴＳ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ 是药物作用的简单相加。柴胡没有健脾益气作用，但对 ｂａｓｅｓ ｏｆｔｈｅ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｏｆｆｅｖｅｒ［Ｊ］．ＰＬｏＳ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００６，４（９）：２８４—２９３． ４］王洪海，谢鸣．复合病因造模法致脾虚证大鼠模型在免疫系统方面 该模型也有良好的退热作用，提示中医药一证对应关系 ［１是相对的。但就对脾虚发热证的整体效应评估来说，柴 胡是否还对该证中脾虚相关指标也有改善作用，值得进 一的变化［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２００６，１２（１２）：４１—４５． ［１５］陈丹云，罗道珊．李东垣“气虚发热”的病机探讨［Ｊ］．中医药学刊， ２００４，２２（１２）：２３１２． 步研究。 （２０１３—０４—２２收稿）