中华妇产科杂志２００６年７月第４１卷第７期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ， Ｊｕｌｙ ２００６，Ｖｏｌ． ４１，Ｎｏ． ７・综述・ 孕妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ测定在产前万方数据诊断中的应用易萍李力陈竹钦 传统的羊膜腔穿刺和绒毛吸取是目前许多医院较为常用的产前诊断技术，因其操作易导致流产、胎儿损伤或死亡、宫内感染、羊膜破裂等，使其在临床上的推广和应用受到了限制。利用孕妇外周血中的胎儿细胞进行遗传学诊断一直是无创性产前诊断的重要探索途径「‘１。但由于孕妇外周血中的胎儿细胞数量少，而且存在个体差异，目前很难从外周血中分离出完整的胎儿细胞，这无疑限制了这种方法在临床上的应用｛’〕。１９９７年，有学者研究发现，孕妇血液循环中存在较丰富的游离胎儿ＤＮＡ，这一发现为无创性产前诊断和筛查开辟了新领域［［２．３７。 近年来，孕妇血液循环中游离胎儿ＤＮＡ的研究已经取得实质性的进展。许多发表的研究方法都是通过检测胎儿特异性的父源性ＤＮＡ序列来鉴定胎儿基因型的。目前利用实时定量ＰＣＲ技术鉴定胎儿性别、ＲｈＤ血型的准确率已接近１００％。在英国和欧洲其他国家的一些研究机构，已将检测ＲｈＤ阴性孕妇血浆或血清中ＲｈＤ基因序列来鉴定胎儿ＲｂＤ血型列入了常规产前诊断。同时对于有发生Ｘ染色体连锁疾病风险的胎儿，应用这种无创性胎儿性别鉴定的方法已取得临床效果［４ｓ７。 研究表明，一些胎儿染色体非整倍体和妊娠并发症可影响孕妇血液循环中胎儿ＤＮＡ的水平，游离胎儿ＤＮＡ水平的升高与胎儿２１三体、妊娠剧吐、羊水过多、子痈前期和溶血、肝酶升高、血小板减少（ＨＥＬＬＰ）综合征有关。有关胎儿ＤＮＡ定量的潜在临床意义已进行了广泛的研究。胎儿ＤＮＡ生物学特性方面的研究在近几年也有了新的进展。本文着重介绍游离胎儿ＤＮＡ定量分析的临床应用和游离胎儿ＤＮＡ的组织来源。 一、关于游离胎儿ＤＮＡ与胎儿染色体非整倍体２１三体是胎儿最常见的染色体异常， 可导致胎儿出生后智力障碍，也称为唐氏综合征。１９９７年，有人首次利用ＰＣＲ技术证明孕育２１三体胎儿的孕妇外周血中胎儿细胞数量比孕育正常胎儿的孕妇高６倍。因此认为这两组孕妇血浆中，胎儿ＤＮＡ可能有类似胎儿细胞样的变化。为了证明这一假想，有学者利用实时定量ＰＣＲ技术扩增Ｙ染色体序列，分别在美国波士顿和中国香港开展研究，在美国波士顿选择的孕育２１三体男性胎儿的７例孕妇和孕育正常男性胎作者单位：４０００４２重庆， 第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科儿的１９例孕妇血浆中，胎儿ＤＮＡ水平的中位数分别为４６基因组当量（ＧＥ）／＂和２３ ＧＥ／ｍｌ；在中国香港选择的孕育２１三体男性胎儿的６例孕妇和孕育正常男性胎儿的１８例孕妇血浆中，游离胎儿ＤＮＡ水平的中位数分别为４８ ＧＥ／ｍｌ和１６ ＧＥ／ｎｌｉ。这项研究提示，孕育２１三体胎儿的孕妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ平均水平比正常孕妇高两倍左右；同时也提示，实时定量ＰＣＲ技术分析孕妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ具有可靠性和可重复性，通过这种方法可在世界不同研究中心开展合作研究［６］。研究认为，通过检测孕妇血清中的胎甲球蛋白（ＡＦＰ）、非结合雌三醇、人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）和抑制素Ａ等，能够发现７０％一８１％唐氏综合征胎儿。在欧洲，一般情况下，所有孕妇均进行这些指标的血清学筛查。而在美国，这项检查只在年龄小于３５岁的孕妇中常规进行，对于年龄更大的孕妇一般采取有创性的检查。Ｆａｒｉｎａ等［［７ｌ评价了孕妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ能否作为筛查唐氏综合征的血清学标志物后发现，单独用孕妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ进行筛查可检测到２１％的唐氏综合征胎儿，与单独用ａ－ＡＦＰ进行筛查的结果相似。如果将游离胎儿ＤＮＡ与目前临床常用的４个标志物一起进行检测，结果发现，唐氏综合征胎儿筛出率由８１％上升到８６％。虽然目前这项研究仅限于男性胎儿，但它表明了游离胎儿ＤＮＡ水平测定可以提高唐氏综合征胎儿的筛出率。Ｗａ ｔａｇａｎａｒａ等１８１将５例孕育１３三体胎儿、５例孕育１８三体胎儿和６０例孕育正常胎儿的孕妇血清标本进行比较，结果发现，孕育１３三体胎儿的孕妇血浆游离胎儿ＤＮＡ水平比正常孕妇有明显升高；而孕育１８三体胎儿的孕妇血浆游离胎儿ＤＮＡ水平与正常孕妇没有差别。由于目前还没有血清学检查可以对１３三体胎儿进行筛查，因此孕妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ水平可能是筛查这种染色体异常的第１个血清学标志物［［９］。 二、游离胎儿ＤＮＡ与子痛前期子痈前期是严重影响母儿健康的妊娠期特有疾病， 发病率高达７％一１０％，是导致孕产妇和围产儿死亡的主要原因。此病主要临床表现为高血压、蛋白尿、水肿，其病因及发病机理至今尚未阐明，滋养细胞侵人障碍导致的细胞因子异常释放被认为是该病的主要原因。ＬＡ等〔’。〕比较了２０例子痛前期和２０例正常对照的孕妇，证实子痛前期孕妇的血浆中游离胎儿ＤＮＡ水平为正常对照的５倍。又有研究表明〔川，最后发展为子痛前期的无症状孕妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ水平比正常孕妇高。Ｌｅｖｉｎｅ等〔１２〕在游离胎儿ＤＮＡ与子痛前期的关系方面进行了大规模的多中心研究，从１２０例子痈前期孕妇和１２０例匹配的血压正常孕妇中获取了６５８份血清标本，第１次抽血时间均于孕２２周前，发现最后发展为子痛前期的孕妇血清游离胎儿ＤＮＡ水平有两个升高时期：第１个时期是发生在孕１３一１７周或更早一些，第２个时期发生在子痛前期症状发生前３周。关于游离胎儿ＤＮＡ与子痛前期的因果联系的机制尚需进一步阐明，但目前认为，其原因可能是由于胎盘异常导致的ＤＮＡ释放增加，以及病程进展中由于肝脏和肾脏功能受损导致游离胎儿ＤＮＡ清除减少。 三、游离胎儿ＤＮＡ与双胎输血综合征双胎输血综合征是双羊膜囊单绒毛膜单卵双胎妊娠的 最严重的并发症。双胎输血综合征发生原因是两个胎儿的胎盘灌注不平衡，从而导致两胎儿生长不一致和双胎之一死亡或两个胎儿均死亡。本病可在胎儿镜直视下利用激光束凝固双胎间吻合血管从而建立功能性双绒毛膜胎盘。但激光束可导致邻近的绒毛小叶的损伤，可为胎盘和游离胎儿ＤＮＡ的相关性研究提供了可能性。为了证明激光产生的热和缺血性胎盘损伤导致游离胎儿ＤＮＡ水平升高的假说，将３４例有双胎输血综合征并发症的孕妇进行了激光烧凝治疗，结果发现，治疗后孕妇血浆中的游离胎儿ＤＮＡ水平持续上升，而且在治疗后２４ ｈ有１个高峰〔‘，〕。虽然孕妇血浆中的游离胎儿ＤＮＡ水平与激光束凝固的血管数量无相关性，但是发现，在至少有１个死胎的孕妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ水平明显升高。这个偶然的发现提示，血浆中游离胎儿ＤＮＡ水平可能作为评价这种新方法疗效的一种预测指标。医源性绒毛小叶损伤和血浆中游离胎儿ＤＮＡ水平的相关性，提示了胎盘是游离胎儿ＤＮＡ的来源［１３］ 四、游离胎儿ＤＮＡ与母一胎输血综合征母一 胎输血综合征是一种少见的产科疾病，即胎儿红细胞由胎盘的绒毛间隙进人孕妇血循环，从而引起胎儿不同程度的失血及孕妇溶血性输血反应。因为其临床表现具有隐匿性，在多数情况下不易做出早期诊断，故围产儿死亡率较高。但母一胎输血综合征缺乏准确的标志物及临床观察指标，尤其在早期妊娠阶段。孕妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ水平的检测技术比较简单，而且重复性好，目前有研究认为，孕妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ水平测定可以反映子宫内操作后的母一胎输血情况「１４１。又有学者对早期妊娠选择性人工流产术后孕妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ进行研究表明，利用实时定量ＰＣＲ扩增Ｙ染色体ＤＹＳ１序列，可以观察到终止妊娠后孕妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ水平升高，尤其在早期妊娠阶段。这与胎盘血管结构和胎儿血细胞生成的功能发育阶段相符，提示游离胎儿ＤＮＡ水平升高是由于医源性损伤了新发育形成的母一胎间血管所造成的〔１５，１６］。进一步应用实时定量ＲＴ－ＰＣＲ技术发现，，珠蛋白ｍＲＮＡ可以作为胎儿红细胞的标志物。虽然血浆中，珠蛋白ｍＲＮＡ含量在许多患者经过人工流产术后降低，但＞孕９周的患者人工流产术后，，珠蛋白万方数据ｍＲＮＡ含量升高，这与血浆中游离胎儿ＤＮＡ水平升高是一致的。这些研究提示，人工流产术后孕妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ水平升高也可能来自于胎儿血细胞，同时提示，定量检测孕妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ水平，为孕９周后的母一胎输血综合征提供了１个新的标志物〔”〕。五、 游离胎儿ＤＮＡ生物学行为和组织来源自从发现孕妇血浆或血清中存在胎儿ＤＮＡ以来， 其组织来源备受关注。目前研究认为，胎盘和胎儿血细胞均是孕妇血浆或血清中游离胎儿ＤＮＡ的主要来源，但仍然存在争论。１． 游离胎儿ＤＮＡ的血细胞来源：所有孕妇血液循环中均存在胎儿细胞和胎儿ＤＮＡ。利用末端脱氧核昔酸转移酶介导的脱氧尿普三磷酸标记法（ＴＵＮＥＬ）免疫染色技术发现母血中有４３％的胎儿细胞具有凋亡标志物。有研究表明，胎儿ＤＮＡ作为凋亡小体存在于孕妇血液循环中〔１８７０Ｈｒｉｓｔｏｓｋｏｖ。等〔１９〕研究表明，母血和脐带血中超过一半的胎儿有核红细胞呈ＴＵＮＥＬ阳性。这些研究提示，许多胎儿细胞通过母一胎界面后要进人程序性细胞死亡。因此，这些细胞可能是携带遗传物质的载体进人孕妇血液循环中。另外，胎儿细胞和胎儿ＤＮＡ在一些妊娠并发症，如子痛前期、胎儿２１三体和羊水过多的情况下同时升高。近年来研究表明，孕妇血浆中，珠蛋白ｍＲＮＡ含量比非孕妇女要高，而且，珠蛋白是胎儿红细胞的标志物。因此，这些研究均支持孕妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ部分来自于造血细胞的学说〔”〕。但是也有一些争论，虽然在子痛前期的情况下孕妇血循环中胎儿有核红细胞和游离胎儿ＤＮＡ水平均升高，但两者并未发现有数量关联。Ｚｈｏｎｇ等〔２０７发现，在正常孕妇血液循环中胎儿有核红细胞和游离胎儿ＤＮＡ没有数量关联。如果胎儿ＤＮＡ来自于胎儿细胞裂解，那么若把血标本放在试管内，胎儿细胞裂解也会释放并增加游离胎儿ＤＮＡ水平。然而，研究发现，将孕妇外周血在试管内放置２４ ｈ，游离胎儿ＤＮＡ水平也未见升高［［２１７。同时研究发现，体外受精成功的双胎孕妇在胚胎移植１８ｄ后，血浆中才可检测到Ｙ染色体ＤＮＡ序列，而且自然妊娠的单胎孕妇在妊娠３２ ｄ后，血浆中才可检测到Ｙ染色体ＤＮＡ序列〔１５，２２］。但是在如此早的妊娠时间，母一胎循环还未建立，不支持妊娠早期游离胎儿ＤＮＡ来自于胎儿血细胞的假说。２． 游离胎儿ＤＮＡ的胎盘来源：通过检测阴道分娩和剖宫产前后母血中游离胎儿ＤＮＡ的水平发现，大多数孕妇在产后２ｈ，血浆中游离胎儿ＤＮＡ已无法检测到。而产后大量的细胞在数周内从孕妇血液循环中被清除，某些细胞亚群在产后可持续存在，甚至数十年。孕妇血浆中胎盘激素的定量检测也支持游离胎儿ＤＮＡ系胎盘来源的假说〔２３７。Ｏｈ ａｓｈｉ等［［４２」发现，妊娠中期妇女血清中游离胎儿ＤＮＡ水平与ｐ－ｈＣＧ有相关性。Ｓｍｉｄ等〔２５发现，双胎孕妇的血浆中游离胎儿ＤＮＡ的水平高于同期单胎孕妇，推测其原因，前者的胎盘比后者重。Ｓｅｋｉｚａｗａ等〔２６１发现，孕足月妇女血浆中游离胎儿ＤＮＡ水平和脐带血浆中母亲ＤＮＡ水平分别为・４９４・中华妇产科杂志２００６年７月第４１卷第７期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ， Ｊｕｌｙ ２００６， Ｖｏｌ． ４１， Ｎｏ． ７万方数据１４％和０．９％。这些研究表明，母一胎界面交换是不平等的，由于存在胎盘，所以有更多游离胎儿ＤＮＡ进人母体。从胎盘的结构特点来看，孕妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ大多数来自绒毛滋养细胞。还有前述的激光烧凝治疗的双胎输血综合征的孕妇，发现治疗后孕妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ水平持续上升，这也支持游离胎儿ＤＮＡ由胎盘来源的假说〔１３］０总之，自发现孕妇血浆中存在胎儿ＤＮＡ已有７年了， 游离胎儿ＤＮＡ水平检测在临床应用范围方面不断扩大。孕育胎儿为２１三体、１３三体的孕妇血液循环中游离胎儿ＤＮＡ水平高于正常孕妇，但在胎儿为１８三体的孕妇中却未见类似现象。子痛前期孕妇血液循环中游离胎儿ＤＮＡ水平高于正常孕妇，而且游离胎儿ＤＮＡ水平变化可能作为子痈前期发病的早期筛查指标。通过定量检测Ｙ染色体序列和，珠蛋白ｍＲＮＡ发现，孕９周以上孕妇的人工流产术后血浆游离胎儿ＤＮＡ水平升高。提示游离胎儿ＤＮＡ水平检测作为母一胎输血综合征的新标志物有一定的临床意义。激光治疗双胎输血综合征后，或胎儿死亡后，母体中游离胎儿ＤＮＡ水平明显升高可能有助于判断治疗的预后。参考文献１ Ｇｕｅｔｔａ Ｅ， Ｓｉｍｃｈｅｎ ＭＪ， Ｍａｍｍｏｎ－Ｄａｖｉｋｏ Ｋ， ｅｔ ａｌ． Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｆｅｔａｌｂｌ ｏｏｄ ｃｅｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｅｒｎａｌ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ： ｃｈａｌｅｎｇｅｓ， ｏｎｇｏｉｎｇ ｅｆｏｒｔｓ，ａｎｄ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ． Ｓｔｅｍ－Ｃｅｌｌｓ－Ｄｅｖ，２００４，１３：９３－９９．２ Ｓｉｍｐｓｏｎ ＪＬ， Ｂｉｓｃｈｏｆ Ｆ． Ｃｅｌｌ－ｆｒｅｅ ｆｅｔａｌ ＤＮＡ ｉｎ ｍａｔｅｒｎａｌ ｂｌｏｏｄ：ｅｖ ｏｌｖｉｎｇ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ． ＪＡＭＡ，２００４，２９１：１１３５－１１３７．３ Ｃｈｉｕ ＲＷ， Ｌｏ ＹＭ． Ｒｅｃｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ｉｎ ｆｅｔａｌ ＤＮＡ ｉｎ ｍａｔｅｒｎａｌｐｌ ａｓｍａ． Ａｎｎ Ｎ ＹＡ ｃａｄ Ｓｃｉ， ２００４，１０２２：１００－１０４．４助ｎｄｅｒｓ ＲＪ， Ｃｈｒｉｓｔｉａｅｎｓ ＧＣ， Ｂｏｓｓｅｒｓ Ｂ， ｅｔ ａｌ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏ ｆ ｃｅｌｌ－ｆｅｒｅ ｆｅｔａｌ ＤＮＡ ｆｏｒｍ ｍａｔｅｒｎａｌ ｐｌａｓｍａ． Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ， ２００４，１０３：１５７－１６４． ５ Ｈａｒｐｅｒ ＴＣ， Ｆｉｎｎｉｎｇ ＫＭ， Ｍａｔｒｉｎ Ｐ， ｅｔ ａｌ． Ｕｓｅ ｏｆ ｍａｔｅｎｒａｌ ｐｌａｓｍａｆ ｏｒ ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｔａｌ ＲｈＤ ｓｔａｔｕｓ． Ａｍ Ｊ ＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏｌ， ２００４，１９１：１７３０－１７３２．６ Ｌｏ ＹＭ， Ｌａｕ ＴＫ， Ｚｈａｎｇ Ｊ，ｅｔ ａｌ． Ｉｎｃｅｒａｓｅｄ ｆｅｔａｌ ＤＮＡ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｉ ｎ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ｏｆ ｐｒｅｇｎａｎｔ ｗｏｍｅｎ ｃａｒｙｒｉｎｇ ｆｅｔｕｓｅｓ ｗｉｔｈ ｔｒｉｓｏｍｙ ２１．Ｃｌ ｉｎ Ｃｈｅｍ，１９９９， ４５：１７４７－１７５１７ Ｆａｒｉｎａ Ａ，ＬｅＳｈａｎｅ ＥＳ，Ｌａｍｂｅｒｔ－Ｍｅｓｓｅｒｌｉａｎ ＧＭ， ｅｔ ａｌ． Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆ ｃｅｌｌ－ｆｅｒｅ ｆｅｔａｌ ＤＮＡ ａｓ ａ ｓｅｃｏｎｄ－ｔｒｉｍｅｓｔｅｒ ｍａｔｅｒｎａｌ ｓｅｒｕｍ ｍａｒｋｅｒ ｏｆＤｏｗｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ． Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ， ２００３，４９： ２３９－２４２８ Ｗａｔａｇａｎａｒａ Ｔ， ＬｅＳｈａｎｅ ＥＳ， Ｆａｉｒｎａ Ｔ， ｅｔ ａｌ．Ｍａｔｅｒｎａｌ ｓｅｒｕｍｆ ｒｅｅ ｆｅｔａｌ ＤＮＡ ｌｅｖｅｌｓ ａｒｅ ｉｎｃｒ－ａ－ｒｄ ｉｎ ｒａｓｒ－ｏｆ ｔｒｉｓｏｍｙ １３ ｂｕｔｃｅｎｌｏｌ－ｔｔ ｉｒｓｏｍｙ １８． Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ， ２００３，１１２： ２０４－２０８．９ Ｓａｌｌｅｒ ＤＮ， Ｃａｎｉｃｋ ＪＡ， Ｂｌｉｔｚｅｒ ＭＧ， ｅｔ ａｌ． Ｓｅｃｏｎｄ－ｔｒｉｍｅｓｔｅｒ ｍａｔｅｒｎａｌｓ ｅｕｒｍ ａｎａｌｙｔｅ ｌｅｖｅｌｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｆｅｔａｌ ｔｉｒｓｏｍｙ １３． Ｐｒｅｎａｔ Ｄｉａｇｎ， １９９９，１９：８１３一１６．１０ Ｌｏ ＹＭ， Ｌｅｕｎｇ ＴＮ， Ｔｅｉｎ ＭＳ， ｅｔ ａｌ． Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ ｏｆｆ ｅｔａｌ ＤＮＡ ｉｎ ｍａｔｅｒｎａｌ ｓｅｒｕｍ ｉｎ ｐｒｅｅｃｌａｍｐｓｉａ． Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ，１９９９， ４５：１８４－１８８． １１ Ｌｅｕｎｇ ＴＮ， Ｚｈａｎｇ Ｊ， Ｌａｕ ＴＫ， ｅｔ ａｌ． Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｍａｔｅｎｒａｌ ｐｌａｓｍａ ｆｅｔａｌＤＮＡ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｗｏｍｅｎ ｗｈｏ ｅｖｅｎｔｕａｌｌｙ ｄｅｖｅｌｏｐ ｐｒｅｅｃｌａｍｐｓｉａ．Ｃｌ ｉｎ Ｃｈｅｍ， ２００１，４７： １３７－１３９＇．１２ Ｌｅｖｉｎｅ ＲＪ， Ｑｉａｎ Ｃ， Ｌｅｓｈａｎｅ ＥＳ， ｅｔ ａｌ． Ｔｗｏ－ｓｔａｇｅ ｅｌｅｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ－ｆ ｒｅｅ ｆｅｔａｌ ＤＮＡ ｉｎ ｍａｔｅｎｒａｌ ｓｅｒａ ｂｅｆｏｅｒ ｏｎｓｅｔ ｏｆ ｐｒｅｅｃｌａｍｐｓｉａ． Ａｍ ＪＯｂｓ ｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ， ２００４， １９０： ７０７－７１３．１３ Ｗａｔａｇａｎａｒａ Ｔ， Ｇｒａｔａｃｏｓ Ｅ， Ｊａｎｉ Ｊ，ｅｔ ａｌ． Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ｅｌｅｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌ－ｆ ｅｒｅ ｆｅｔａｌ ＤＮＡ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｍａｔｅｒｎａｌ ｐｌａｓｍａ ａｔｆｅｒ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｌａｓｅｒ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ ｐｌａｔｅ ａｎａｓｔｏｍｏｓｅｓ ｉｎ ｓｅｖｅｅｒ ｍｉｄｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌｔ ｗｉｎ－ｔｗｉｎ ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ． Ａｍ ＪＯｂｓ ｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ， ２００５，１９２：６０４－ ６０９．１４ Ｌａｕ ＴＫ， Ｌｏ Ｋ％，Ｃｈａｎ ＬＹ， ｅｔ ａｌ． Ｃｅｌｌ－ｆｒｅｅ ｆｅｔａｌ ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉ ｄ ｉｎ ｍａｔｅｒｎａｌ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ａｓ ａ ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｆｅｔａｌ－ｍａｔｅｒｎａｌ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅｉ ｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｃｅｐｈａｌｉｃ ｖｅｒｓｉｏｎ ｎｅａｒ ｔｅｒｍ． Ａｍ Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ， ２０００，１８３：７１２－７１６．１５ Ｗａｔａｇａｎａｒａ Ｔ， Ｃｈｅｎ ＡＹ， ＬｅＳｈａｎｅ ＥＳ， ｅｔ ａｌ． Ｃｅｌｌ－ｆｅｒｅ ｆｅｔａｌ ＤＮＡｌ ｅｖｅｌｓ ｉｎ ｍａｔｅｒｎａｌ ｐｌａｓｍａ ａｆｔｅｒ ｅｌｅｃｔｉｖｅ ｆｉｒｓｔ－ｔｉｒｍｅｓｔｅｒ ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆｐｒ ｅｇｎａｎｃｙ． Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ，２００４，８１：６３８．６４４．１６ Ｗａｔａｇａｎａｒａ Ｔ， Ｌｅｓｈａｎｅ ＥＳ， Ｃｈｅｎ ＡＹ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ－ｆｒｅｅ ｆｅｔａｌｎｕｃｌ ｅｉｃ ａｃｉｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｍａｙ ｂｅ ａ ｎｏｖｅｌ ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｆｅｔｏｍａｔｅｍａｌｈｅｍｏｒ ｒｈａｇｅ ａｔｆｅｒ ｅｌｅｃｔｉｖｅ ｆｉｒｓｔ－ｔｉｒｍｅｓｔｅｒ ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ．Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ， ２００４，１０２２：１２９－１３４１７ Ｗａｔａｇａｎａｒａ Ｔ， ＬｅＳｈａｎｅ ＥＳ， Ｃｈｅｎ ＡＹ， ｅｔ ａｌ． Ｐｌａｓｍａ ｇａｍｍａ－ｇｌｏｂｉｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｕｇｇｅｓｔｓ ｔｈａｔ ｆｅｔａｌ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｓ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ ｔｏｔ ｈｅ ｐｏｏｌ ｏｆ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ－ｆｅｒｅ ｆｅｔａｌ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ ｄｕｒｉｎｇ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ．Ｃｌ ｉｎ Ｃｈｅｍ，２００４，５０： ６８９－６９３．１８ Ｂｉｓｃｈｏｆｆ ＦＺ， Ｄａｎｇ Ｄ， Ｈｏｍｅ Ｃ， ｅｔ ａｌ． Ｆｅｔａｌ ＤＮＡ ｉｎ ｍａｔｅｎｒａｌ ｐｌａｓｍａ ｃｉｒｃｕｌａｔｅｓ ａｓ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｂｏｄｉｅｓ： ｅｌｕｃｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｎａｔ ｕｒｅ ｏｆ ｆｅｔａｌ ＤＮＡ ｆｏｒ ｎｏｎ－ｉｎｖａｓｉｖｅ ｐｒｅｎａｔａｌ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ． Ａｍ ＪＨｕｍ Ｇｅｎｅｔ， ２００３，７３ （Ｓｕｐｐｌ） ：１８９．１９ Ｈｒｉｓｔｏｓｋｏｖａ Ｓ， Ｈｏｌｚｇｒｅｖｅ Ｗ， Ｈａｈｎ Ｓ． Ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｏｎｅ－ｈａｌｆ ｏｆ ｔｈｅｅ ｒｙｔｈｒｏｂｌａｓｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｅｔａｌ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ，ＴＵＮＥＬｐｏｓ ｉｔｉｖｅ． Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ， ２００１，４７：１８７０－１８７１．２０ Ｚｈｏｎｇ ＸＹ， Ｈｏｌｚｇｒｅｖｅ Ｗ， Ｈａｈｎ Ｓ． Ｃｅｌｌ－ｆｒｅｅ ｆｅｔａｌ ＤＮＡ ｉｎ ｔｈｅｍａ ｔｅｎｒａｌ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｓｔｅｍ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｐｌａｃｅｎｔａｌ ｐａｓｓａｇｅ ｏｆｆ ｅｔａｌ ｅｒｙｔｈｒｏｂｌａｓｔｓ． Ｍｏｌ Ｈｕｍ Ｒｅｐｒｏｄ， ２００２， ８：８６４－８７０．２１ ＡｎｇｅｔｒＲＭ， ＬｅＳｈａｎｅ ＥＳ， Ｌｏ ＹＭ， ｅｔ ａｌ． Ｆｅｔａｌ ｃｅｌｌ－ｆｒｅｅ ｐｌａｓｍａ ＤＮＡｃｏｎｃｅｎｔ ｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｍａｔｅｒｎａｌ ｂｌｏｏｄ ａｒｅ ｓｔａｂｌｅ ２４ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ：ａ ｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｆｉｒｓｔ－ ａｎｄ ｔｈｉｒｄ－ｔｒｉｍｅｓｔｅｒ ｓａｍｐｌｅｓ． Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ， ２００３，４９：１９５－１９８． ２２ ＧｕｉｂｅｒｔＪ ， Ｂｅｎａｃｈｉ Ａ， Ｇｒｅｂｉｌｅ ＡＧ， ｅｔ ａｌ． Ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ＳＲＹ ｇｅｎｅ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ ｉｎ ｍａｔｅｎｒａｌ ｓｅｒｕｍ； ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ｒｅａｌ ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｉｎ ｅａｒｌｙｐｒ ｅｎｇａｎｃｙ ａｔｆｅｒ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ． Ｈｕｍ Ｒｅｐｒｏｄ，２００３，１８：１７３３－ １７３６．２３ Ｎｇ ＥＫ， Ｔｓｕ ＮＢ， Ｌａｕ ＴＫ， ｅｔ ａｌ． ｍＲＮＡ ｏｆ ｐｌａｃｅｎｔａｌ ｏｒｉｇｉｎ ｉｓ ｅｒａｄｉｌｙｄｅｔ ｅｃｔａｂｌｅ ｉｎ ｍａｔｅｒｎａｌ ｐｌａｓｍａ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００３，１００：４７４８４７５３． ２４ Ｏｈａｓｈｉ Ｙ， Ｍｉｈａｒｕ Ｎ， Ｈｏｎｄａ Ｈ， ｅｔ ａｌ． Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｔａｌ ＤＮＡ ａｎｄｈｕｍａｎ ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ ｇｏｎａｄｏｔｏｒｐｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｓｅｃｏｎｄ－ｔｒｉｍｅｓｔｅｒｍａｔ ｅｒｎａｌ ｓｅｒｕｍ． Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ，２００２，４８：３８６－３８８．２５ Ｓｍｉｄ Ｍ， Ｇａｌｂｉａｔｉ Ｓ， Ｖａｓｓａｌｌｏ Ａ， ｅｔ ａｌ． Ｆｅｔａｌ ＤＮＡ ｉｎ ｍａｔｅｒｎａｌｐｌ ａｓｍａ ｉｎ ｔｗｉｎ ｐｒｅｎｇａｎｃｉｅｓ． Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ，２００３，４９：１５２６－１５２８．２６ Ｓｅｋｉｚａｗａ Ａ， Ｙｏｋｏｋａｗａ Ｋ， Ｓｕｇｉｔｏ Ｙ， ｅｔ ａｌ． Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆｂｉ ｄｉｅｒｃｔｉｏｎａｌ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ＤＮＡ ｔｈｒｏｕｇｈ ｐｌａｃｅｎｔａ． Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ，２００３，１１ ３： ３０７－３１０．（收稿日期：２００５－０９－２７）（本文编辑：侯存明）